蛋白質定量是許多生物研究和工業過程中的關鍵步驟。準確測量蛋白質濃度對于各種應用至關重要，例如研究蛋白質-蛋白質相互作用、評估酶活性以及確定下游分析的蛋白質濃度。二辛可寧酸(BCA)蛋白質測定因其高靈敏度、重現性以及與各種樣品類型的兼容性而成為廣泛使用的蛋白質定量方法。

  二辛可寧酸(BCA)蛋白質測定原理

  二辛可寧酸（BCA）蛋白質測定法是一種廣泛使用的定量測定樣品中總蛋白質的方法。BCA測定依賴于在堿性條件下，蛋白質將Cu2?離子還原為Cu?離子。隨后，生成的Cu?離子與BCA試劑反應，形成一種吸收562nm波長光的紫色絡合物。使用分光光度計測量該絡合物的吸光度。生成的絡合物的量與樣品中蛋白質的含量成正比，因此通過測量吸光度可以間接確定樣品中的蛋白質濃度。

  為什么要進行二辛可寧酸(BCA)蛋白質測定？

  二辛可寧酸（BCA）蛋白質測定是一種可靠且靈敏的定量測定樣品中總蛋白質的方法。它比Bradford測定更靈敏，能夠檢測低至0.5μg/mL的蛋白質濃度。BCA測定對非蛋白質來源的干擾具有更高的耐受性，例如去污劑、還原劑和脂質，這些物質可能會干擾其他蛋白質測定方法。由于其高靈敏度和對干擾物質的耐受性，BCA測定廣泛應用于生化研究、生物技術和臨床診斷中，用于定量各種樣品類型（例如血清、血漿和細胞裂解物）中的總蛋白質。相關閱讀：8種蛋白質濃度檢測方法詳解

  二辛可寧酸(BCA)蛋白質測定方案

  材料：

  BCA工作試劑（見下方配方）

  BSA標準品（見下方配方）

  蛋白質樣品

  96孔微孔板

  酶標儀

  BCA工作試劑配方：

  BCA試劑A：含有50mg/mL二辛可寧酸的2%碳酸鈉溶液

  BCA試劑B：含有4%硫酸銅的0.4N氫氧化鈉溶液

  將50份BCA試劑A與1份BCA試劑B混合，混勻后在室溫下孵育30分鐘備用。

  BSA標準品配方：

  將10mgBSA溶解在10mL蒸餾水中，制成1mg/mL儲備液。制備一系列已知濃度范圍為0至2mg/mL的BSA標準溶液，使用蒸餾水進行稀釋。

  程序：

  1、將50份BCA試劑A和1份BCA試劑B混合，制備BCA工作試劑。混勻后在室溫下孵育30分鐘備用。

  2、制備一系列已知濃度范圍為0至2mg/mL的BSA標準溶液，使用蒸餾水進行稀釋。

  3、將10μL每種BSA標準溶液和蛋白質樣品分別移入96孔微孔板的單獨孔中。

  4、向每個孔中添加200μLBCA工作試劑。

  5、通過輕輕移液或搖動板子充分混合。

  6、在37°C下孵育板子30分鐘。

  7、孵育后，將板子冷卻至室溫。

  8、使用酶標儀在562nm處測量吸光度。最好在反應停止后30分鐘內讀取吸光度。

  9、使用BSA標準品的吸光度值繪制標準曲線。

  10、使用標準曲線計算樣品中的蛋白質濃度。

  成功進行二辛可寧酸(BCA)蛋白質檢測的技巧：

  1、確保BCA工作試劑在使用前充分混合。

  2、使用不含蛋白質的樣品作為空白對照來校準微孔板讀數儀。

  3、使用BSA作為標準蛋白質，因為它具有明確的結構并且在溶液中穩定。

  4、使用蒸餾水制備所有溶液并稀釋蛋白質樣品。

  5、避免蛋白質樣品中含有高濃度的去垢劑或還原劑，因為它們會干擾測定。

  二辛可寧酸（BCA）蛋白質測定法是一種可靠且靈敏的定量方法，適用于各種科研領域中的蛋白質檢測。本方案詳細介紹了BCA試劑的配方、標準品的制備以及具體的操作步驟，并提供了一些成功進行檢測的技巧。這些指導不僅能幫助科研人員在實驗中獲得準確和一致的結果，還能減少由于干擾物質引起的測定誤差。通過遵循上述方案，科研人員能夠高效地進行蛋白質定量，從而支持進一步的生化研究和應用。希望本指南能為您的科研工作提供實質性的幫助。