酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 簡稱。是免疫學檢測應用比較廣的技術。ELISA具有更高的靈敏度和專一性，可以檢測非常低濃度的生物分子，如蛋白質、抗體和細胞因子等，并可區分相似的分子。這使得ELISA 在診斷疾病、監測病情、檢測病原體等方面更加具有可信度和精確度。下面通蔚生物給大家詳細介紹下ELISA實驗原理。

  

  ELISA實驗原理

  

  Elisa為免疫學反應為基礎，在ELISA技術中，將抗原固定在固相表面上，然后與抗體結合形成抗原抗體鍵復合物，其中抗原抗體復合物與酶結合。由于酶與底物之間的反應，會形成顏色變化形式的檢測信號。在ELISA實驗應用中，具體方法有很多種，比如常見的用于檢測抗體包括直接法、間接法、競爭法和夾心法等。

  

  ELISA操作步驟

  

  有幾種不同的 ELISA 測定技術，但它們都利用在 96 孔聚苯乙烯板固相載體。這些孔經過化學處理，使其具有“粘性”，從而增加了蛋白質吸附到板表面的能力。

  

  ELISA 測定依賴于酶結合標記和底物之間的酶促反應來產生比色、化學發光或熒光產物。然后通過分光光度計或熒光計檢測和定量這些產物，提供有關樣品中目標蛋白濃度的信息。

  

  ELISA 由多個步驟組成。其中許多步驟是封閉和洗滌步驟，以防止非特異性結合。當蛋白質通過脫靶相互作用相互吸附或吸附到 ELISA 板的固相表面時，就會發生非特異性結合。不同方法之間的確切 ELISA 步驟略有不同，但這里我們將重點關注夾心 ELISA作為示例。

  

  夾心ELISA（酶聯免疫吸附分析），該實驗基本原理是抗體-抗原之間的特異性結合反應，通過夾心模式將抗體固定在酶標板孔中，再加入樣本和酶標二抗，最后通過底物顯色反應讀取光密度值，從而計算出抗原或抗體的濃度。

  

  實驗器材：酶標板、抗體、樣本、酶標二抗、底物等

  

  實驗步驟步驟：本實驗步驟分為九個步驟

  

  夾心 ELISA 步驟：

  

  第 1 步：捕獲蛋白的固定化

  

  在夾心 ELISA 中，捕獲蛋白是抗體，目標是抗原。因此，ELISA 的第一個步驟是將捕獲抗體固定到板上。許多 ELISA 試劑盒都帶有預先固定的捕獲蛋白。

  

  第 2 步：洗掉孔表面任何未吸附的捕獲蛋白

  

  使用去污劑的洗滌步驟可減少蛋白質之間的脫靶疏水相互作用，并從板上去除未結合的捕獲蛋白質。

  

  第 3 步：封閉板上任何未結合的位點

  

  蛋白質之間的疏水相互作用是由電荷或疏水性介導的。這意味著可以通過封閉和清洗步驟在一定程度上減輕它們。

  

  將蛋白質添加到板中，蛋白質吸附到板表面的開放位點。牛血清白蛋白 (BSA)、酪蛋白或抑肽酶等蛋白質通常用于 ELISA 測定中的封閉。

  

  這些蛋白質將吸附到板上，從而防止目標蛋白質隨后訪問這些位點。以這種方式降低非特異性結合的發生率會導致背景噪音降低。

  

  第 4 步：洗掉孔中所有未吸附的封閉蛋白

  

  第二個洗滌步驟去除任何未結合的封閉蛋白。

  

  第 5 步：與樣品（血清、尿液、唾液或加標研究溶液）一起孵育

  

  在這一步中，抗體和抗原之間發生特異性識別。在夾心 ELISA 中，抗體被吸附到板上，并與樣品液中的目標抗原結合。這需要一個孵育步驟以使結合動力學達到平衡。

  

  第6步：洗掉孵化液

  

  這是至關重要的洗滌步驟，通常需要多次洗滌以確保洗掉任何未結合的抗原。在此步驟之后，孔中唯一應保留的抗原是那些附著于捕獲抗體的抗原。

  

  第7步：與檢測抗體一起孵育

  

  ELISA 中的檢測抗體與某種標記物結合，例如熒光團（用于熒光測定）或酶（用于比色檢測或化學發光）。檢測抗體“識別”目標抗原上與捕獲抗體不同的表位。因此，三明治 ELISA 測定產生捕獲抗體-抗原-檢測抗體的“三明治”。

  

  第8步：洗掉未結合的檢測抗體

  

  步驟9：應用底物進行化學比色或化學發光反應，或應用入射光進行熒光反應，并對信號進行定量

  

  根據所使用的 ELISA 方法，熒光量、發光量或顏色強度表明從樣品中捕獲了多少目標抗原。

  

  Elisa實驗應用

  

  ELISA 測試有多種應用，例如食品工業、疫苗開發、免疫學、診斷、藥物監測、制藥工業和移植。

  

   食品工業

  

  ELISA 在食品工業中發揮著重要作用。它是識別食物過敏原（例如牛奶、花生、核桃、杏仁和雞蛋中的過敏原）的主要平臺。ELISA 還可用于證實食品的真實性。該技術對于避免冒充替代可能造成的經濟損失有很大幫助。

  

  疫苗開發

  

   疫苗開發是 ELISA 的一個非常重要的應用，它是 ELISA 過程的一個很好的候選者。可以測試來自免疫動物或人類模型的血清樣本，以檢測是否存在針對有意注射到宿主體內的某些類型抗原的抗體。

  

  免疫學

  

  身體的防御者，免疫系統，可以以細胞或體液（先天或適應性）模式運作。測量和監測免疫反應的變化是了解免疫疾病的基礎。各種研究已證明 ELISA 是此類測量和監測的金標準方法，該方法快速且經濟高效。

  

  體液免疫

  

  ELISA 在研究免疫系統對不同類別感染的體液反應方面也顯示出巨大的潛力。體液免疫反應涉及體液中存在的物質（抗體和其他成分）。

  

  診斷

  

  在診斷領域，ELISA 已被證明是一個在全球范圍內應用的強大平臺，可用于檢測人類和動物的多種疾病類型。市場上有許多不同的商業 ELISA 試劑盒可用于檢測 HIV、流感、登革熱、埃博拉、恰加斯病、利什曼病、萊姆病、西尼羅河病毒等。即使在植物病理學中，ELISA 技術也越來越受到關注。ELISA 成功克服了以前在植物診斷中進行的血清學分析的缺點

  

  懷孕測試

  

  許多不同的生物分子實體，包括人絨毛膜促性腺激素（hCG）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌三醇（E3）和促甲狀腺激素（TSH）可以因懷孕而表達。ELISA 可以在妊娠早期從母體血液、唾液或尿液中檢測到其中一些蛋白質。HCG 是常見的激素之一，可在受精后第一個月通過 ELISA 檢測到。另一種與妊娠相關的生物分子是雌三醇 (E3)，可在妊娠第 6 周時通過唾液中的 ELISA 檢測到。

  

  癌癥檢測

  

  高靈敏度的癌癥檢測提供了早期診斷，這對于患者的生存至關重要。然而，癌癥生物標志物是作為目標分析物最具挑戰性的生物分子實體之一。ELISA 技術的進步有望應用于癌癥生物標志物的檢測。

  

  ELISA實驗的優缺點

  

  與其他免疫測定技術相比，ELISA 有許多優點。elisa具有高靈敏度和特異性。與放射免疫分析 (RIA) 測試等其他技術相比，ELISA 還提供更高的準確性。

  

  ELISA 測定通常采用 96 孔微孔板。主要優點是一次運行可進行 96 次測定，通常在 3 小時內即可提供結果。這既快速又具有成本效益。

  

  ELISA 程序使用簡單。由于抗體和抗原之間的反應，它具有出色的靈敏度和高特異性。ELISA 還非常高效，因為無需任何復雜的樣品預處理即可輕松進行同步分析。由于避免使用放射性物質和大量有機溶劑，ELISA 測試既環保又安全。

  

  ELISA實驗所有方法的缺點很明顯：

  

  1、重復性不好；

  

  2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現假陽性；

  

  3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時間。

  

  上述文章為大家介紹ELISA實驗的原理，通過了解ELISA實驗原理可以幫助我們更好的認識和提高ELISA實驗操作，為科研提供有利的技術支持。

  

  最后

  

  上海通蔚ELISA試劑盒采用經過精心設計和篩選的抗原抗體對，保證了實驗的特異性和靈敏度，使您能夠準確地捕捉目標分子。

  

  上海通蔚生物始終堅持以客戶為中心，提供全面的技術支持和售后服務。我們的專業團隊將隨時為您解答實驗中遇到的問題，確保您的研究順利進行。