現如今,遺傳學幫我我們越來越多的了解周圍世界,通過遺傳學技術解開進化史,更精確診斷和治療疾病。為了完成這些工作,我們需要發現并檢測DNA序列,然而,我們用來執行操作基本工具之一稱為“PCR”或“
聚合酶鏈式反應”。今天,上海通蔚給大家介紹一下
PCR檢測試劑盒作用原理及組成。
PCR檢測試劑盒組成
DNA模版。DNA模版,DAN模版可以包含人類血液樣品、食物樣品、水樣品以及棉簽上收集的細菌等等。
引物(primers)。我們要擴增DNA區域,我們需使用稱為DNA片段來實現這一點。引物的類型分為正向和反向兩種,正向引物將匹配我們想要擴增的區域開頭的一條DNA鏈上的序列,反向序列引物將匹配另一條鏈上區域的末端。引物在PCR反應起上引導DNA聚合酶合成新的DNA鏈的作用。
酶(enzymes)。在PCR檢測中最主要的酶是熱穩定的DNA聚合酶,DNA聚合酶可以找到引物與DNA模版特異性結合區域的末端,并在適當的條件下催化DNA合成。最常用的是來自熱液微生物生物體的熱穩定DNA聚合酶,如Taq DNA聚合酶。
緩沖液(buffer):PCR檢測試劑中的緩沖液用于維持PCR最佳的反應條。它主要作用是控制PH值、離子濃度和穩定酶的活性。
核苷酸(nucleotides)。核苷酸是PCR試劑中DNA合成的原料。包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞苷酸(dCTP)和脫氧胸苷酸(dTTP)。供給PCR反應中的DNA聚合酶在合成新鏈時使用。
PCR檢測試劑盒作用原理
根據PCR技術的工作原理設計,在進行PCR反應時,主要分為三個步驟:
第一步,變性。模版DNA經過加熱至93°左右,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下一步退火做準備。
第二步,退火。模版DNA變性成單鏈之后,使溫度至55度左右,模板DNA單鏈能夠與引物的互補序列配對結合。
第三步,延伸。DNA模版引物在72度下,DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP(脫氧核糖核苷三磷酸,可構成DNA)為反應原料,靶序列為模板,按照堿基互補配對原則和半保留復制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補的復制鏈。
上述為大家總結了PCR檢測試劑盒的組成和作用原理,希望上述文章對大家有所幫助。在操作實驗過程可以配合說明書及實驗過程的注意事項。