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從零到一:ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟完全指南

發(fā)布時(shí)間:2023-12-06     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟。大家在操作實(shí)驗(yàn)過程中,通常包括包被、封閉、洗滌、加入酶標(biāo)抗體和顯色液等。針對(duì)上述步驟,小蔚為大家一一詳細(xì)介紹。



ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

  第一步包被。把抗原和共享載體結(jié)合起來,之后就是比較重要一步就是洗滌,在整個(gè)ELISA實(shí)驗(yàn)過程相對(duì)來說比較重要的一步,每一次操作中間都要洗滌。洗滌液一般是緩沖液,里面加上吐溫,土溫是去污劑,可以有效把沒有結(jié)合的物質(zhì)洗掉。

  第二部是封閉。就是固相材體就相當(dāng)于一個(gè)非常大的空間,抗原只是結(jié)合了其中非常少的一部分,其他地方還有很多待結(jié)合的位點(diǎn),需要用到雜蛋白去把這些位點(diǎn)全部都覆蓋起來,才能不讓一抗和二抗與空白的位點(diǎn)結(jié)合。

  第三步是洗滌。封閉之后,還要把多余的蛋白洗滌之后,就可以進(jìn)行加樣,把待檢抗體加進(jìn)體系中,讓待檢抗體和包在固項(xiàng)載體上的抗原進(jìn)行待異性的結(jié)合。把多余的待檢測(cè)抗體洗滌之后,就會(huì)得到這樣的抗原和抗體結(jié)合的復(fù)合物。

  第四步是加入酶標(biāo)二抗。這部分抗體屬于一抗的FC端結(jié)合的抗體,同時(shí)還帶著酶標(biāo)記,所以它是起到兩種作用。把多余的二抗洗滌之后,就會(huì)形成一種二抗、一抗和待檢測(cè)抗原的還有酶的復(fù)合物。

  最后就是加入顯色液。可以讓它產(chǎn)生顏色的反應(yīng)。終止之后一般是加入氫氧根或者酸根離子,就是鹽酸或者氫氧化鈉去終止整個(gè)反應(yīng),這就是ELISA實(shí)驗(yàn)過程。

  接下來就是拿酶標(biāo)語上去讀數(shù),得到最終把它量化的儀器叫做酶標(biāo)語,就是專門去作為讀數(shù)用的。一般來說現(xiàn)在用鹽酸中指的波長(zhǎng)反應(yīng)是450納米,去對(duì)它進(jìn)行讀數(shù),最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行量化的體現(xiàn)。

  在ELISA過程中,要注意以下幾點(diǎn):

  第一點(diǎn)是包被液的選擇。包被液就是把抗原包被在固相載體上的稀釋液S包,一般是兩種,一種是PBS,最常用的兩種是PBS和CPS,其中這兩個(gè)里面就更常用則是PBS。

  第二點(diǎn)是包被溫度的選擇。一般來說這邊都是4度條件下,4度調(diào)一下包被過夜或者37度保溫2小時(shí),37度反應(yīng)會(huì)更快一點(diǎn),但是反應(yīng)效果一般是沒有4度是好的,所以剪映是4度條件下包被。

  第三點(diǎn)是包被濃度的選擇。包被濃度是根據(jù)實(shí)驗(yàn)效果、實(shí)驗(yàn)條件還有包被物質(zhì)的性質(zhì)去改變的。一般來說包被濃度推薦是1-5微克每毫升。

  上述是elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng),在elisa實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格遵循說明書和注意事項(xiàng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會(huì)更加精確。


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