酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)因其高靈敏度而受到青睞，能夠檢測出非常低濃度的物質(zhì)（低至每毫升0.0001-0.01毫克）。它廣泛用于查找和測量肽、蛋白質(zhì)、抗體、激素、藥物和潛在的食物過敏原，如牛奶、花生和雞蛋，這些對于轉(zhuǎn)基因食品檢測很重要。它的工作原理是利用抗原和抗體之間的特定相互作用，以及產(chǎn)生可檢測信號的酶。ELISA于20世紀70年代開發(fā)，利用抗體的精確度和酶的活性來分析生物樣本，從而提供一種靈敏而具體的方法。隨著時間的推移，ELISA不斷改進以提高其靈敏度，現(xiàn)在有不同類型的ELISA來檢測各種生物標志物。

  Elisa實驗方案：

  一、涂層：

  涂層將抗原或捕獲抗體固定在微量滴定板上。

  這是通過將培養(yǎng)皿與含有抗原或抗體的溶液一起孵育來完成的。

  抗原或抗體的選擇取決于具體的應用和靶分子。

  適當?shù)臐舛群头跤龝r間對于成功的檢測結果至關重要。

  二、阻塞：

  阻斷可防止微量滴定板上的非特異性結合。

  降低背景噪音并提高檢測特異性。

  用一抗或抗原包被后，向孔中添加封閉蛋白（例如，BSA、酪蛋白或牛奶）。

  阻斷蛋白質(zhì)與未占據(jù)的位點結合，減少非特異性結合。

  孵育培養(yǎng)板以允許阻斷蛋白結合，然后用緩沖液洗去多余的蛋白。

  阻斷后，可將一抗或抗原添加到孔中。

  三、樣品和標準添加：

  標準通常是一組已知濃度的抗原，用于生成校準曲線。

  將已知濃度的標準品添加到板的單獨孔中，而將未知樣品添加到重復的或重復的三孔中。

  四、一抗孵育：

  此步驟涉及添加特定的一抗以結合微量滴定板上的抗原。

  一抗通常來自特定物種（例如小鼠或兔）并且可以被標記或未標記。

  如果一抗未標記，則稍后添加與酶（例如HRP或AP）偶聯(lián)的二抗以產(chǎn)生可測量的信號。

  五、二抗孵育：

  一抗-抗原復合物將二抗連接至微量滴定板。

  這種連接使得酶能夠與底物結合并產(chǎn)生可測量的信號。

  來自酶偶聯(lián)二抗的信號與樣品中一抗或抗原的量成比例。

  六、底物添加：

  底物與二抗偶聯(lián)的酶發(fā)生反應，產(chǎn)生可檢測的信號，該信號可使用微孔板讀數(shù)儀進行量化。

  顯色底物會產(chǎn)生可在特定波長下讀取的有色反應產(chǎn)物，而化學發(fā)光底物則會發(fā)出光，可通過光度計進行測量。

  應優(yōu)化反應時間和底物濃度以產(chǎn)生足夠的信號而不引起背景噪音。

  七、停止解決方案：

  常用的終止溶液是硫酸，在底物孵育步驟后將其添加到孔中。

  添加終止溶液對于確保反應不再繼續(xù)以及產(chǎn)生的信號穩(wěn)定且可重復至關重要。