在實驗室里，沒有什么比細胞無法生長或細胞培養物無法附著更令人抓狂的了。細胞生長受阻和培養行為不穩定會延誤項目、讓團隊感到沮喪，并使科研人員疑惑到底出了什么問題以及如何解決。

  這些問題的解決方案并不總是那么簡單。細胞培養很復雜，需要花時間來分析過程并找出問題。通常，最常見的問題包括異常生長模式或細胞附著不均勻或不一致。其他問題包括生長速度緩慢或突然變化或無法解釋的結果。

  這些問題往往與培養技術、孵化和培養基有關。跟隨上海通蔚生物一起探討一下這些痛點，以及如何通過良好的做法預防它們的影響。

  什么原因導致細胞培養失敗？如何處理？

培養技術

  細胞培養是一個復雜的過程，任何步驟的失誤都可能導致培養失敗。當細胞培養出現問題時，首先要評估的是處理技術，因為處理不當是導致失敗的常見原因。下面通蔚生物為大家盤點幾種細胞培養技術中比較常見的原因：

  細胞接種物處理不均勻或混合不充分會產生泡沫，從而阻礙細胞生長和附著，并在容器上留下斑點。使用無菌吸管或移液器輕輕混勻細胞懸液，確保細胞均勻分布在培養容器中。避免過度混合，以免產生泡沫。

  靜電會破壞塑料容器中的細胞附著，尤其是在干燥環境。打開容器時，盡量不要讓容器與包裝摩擦。擦拭容器外部或使用防靜電設備也可以阻止靜電。

  細胞接種量不足會導致容器壁上細胞生長過快。根據細胞類型和培養面積選擇合適的接種量。觀察細胞生長情況，及時調整接種量。

  滾輪瓶的旋轉速度可能會導致大量生長或結塊。將起始速度設置為每分鐘半轉至每分鐘一轉之間，并根據需要進行調整。保持滾輪清潔，以防止打滑或失速。

  定期觀察細胞生長情況，注意細胞形態、密度、生長速度等變化。通常可以判斷出出現了問題。為了最好地檢測這些問題，使用戊二醛或乙醇固定樣本培養物，然后在觀察前對其進行染色。除了上述培養技術中幾個問題，下面為大家也列出關于孵化和細胞培養基問題。

  孵化問題

  盡管使用培養箱的目的是盡量減少溫度變化等環境因素，但許多變量仍然會影響生長速度和培養活力：

  在實驗過程中反復打開培養箱會導致溫度變化；容器的堆放方式和位置也會導致溫度變化。除非迫不得已，否則不要打開培養箱，并將關鍵培養物放在后面。還要考慮堆放培養皿的位置效應；最下面的培養皿最靠近金屬架，因此加熱速度更快。

  蒸發影響細胞生長速度和模式；保持水箱充滿水并使用氣體洗滌缸加濕進入的氣體可最大限度地減少蒸發。

  振動會導致細胞生長異常，例如形成同心細胞環。振動可能來自孵化器中松動的風扇馬達，也可能來自其他任何來源，例如人流或電動設備。將孵化器放置在堅固的表面上，且沒有其他會振動的設備。

  其他環境預防措施，如保持孵化器水平且不含有毒雜質，對于正常生長也至關重要。

  細胞培養基問題

  培養基缺陷并不總是可見的，許多因素（例如試劑質量不足、緩沖液和過濾，甚至熒光毒性）都會影響培養基的功能。

  除了確保你使用正確的配方進行研究并購買高質量的用品外，測試培養基功能的最佳方法是進行實驗。將有問題的培養基與其他制造商的相同培養基進行比較。如果新培養基產生相同的結果，則可能是技術或孵化方面的問題。

  上述為大家羅列出細胞培養過程經常遇到的一些問題，大家如果遇到細胞培養問題，可以逐一的去找到對應原因進行解決問題。如果對細胞培養還有什么疑問，歡迎前來咨詢通蔚生物，通蔚生物有多年的細胞培養經驗，包括代測服務。同時也祝您今后細胞培養更上一層樓。