發(fā)布時(shí)間:2024-01-09 發(fā)布作者:上海通蔚生物
通過 ELISA,可以輕松檢測(cè)和定量溶液中的免疫球蛋白,無論您是在尋找抗原特異性 Ig 還是總 Ig,例如 IgG、IgA... 在本文中,將引導(dǎo)您完成不同的檢測(cè)設(shè)置,準(zhǔn)備您來解決您的具體研究問題。關(guān)于LG,可以參考《什么是抗體》
抗體是特異性結(jié)合靶分子的蛋白質(zhì),因此是脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)的核心參與者。在上個(gè)世紀(jì),我們?nèi)祟愐呀?jīng)學(xué)會(huì)利用其獨(dú)特的特性在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行應(yīng)用。最終,我們可以在測(cè)定中使用抗體來檢測(cè)其他抗體。
圖 1. ELISA 中檢測(cè) IgG 的三種不同設(shè)置的測(cè)定原理。抗原特異性 IgG 可以通過 A) 間接或 B) 反向設(shè)置進(jìn)行檢測(cè),總 IgG 可以通過 C) 夾心設(shè)置進(jìn)行檢測(cè)。這是 IgG 評(píng)估的示例;可以使用相應(yīng)的測(cè)定抗體對(duì)該測(cè)定進(jìn)行修改以檢測(cè)其他 Ig 同種型或亞類。
檢測(cè)抗原特異性免疫球蛋白的設(shè)置與經(jīng)典的夾心測(cè)定不同。最常見的方法是首先將抗原涂覆到板上(圖 1A)。或者,可以在反向設(shè)置中使用標(biāo)記抗原(圖 1B)。無論您選擇哪種設(shè)置,請(qǐng)記住,抗原特異性 ELISA 在很大程度上取決于抗原的天然形式或盡可能接近的形式。用于檢測(cè)的抗原通常是由研究人員自己重組產(chǎn)生的,但有些也可以從市場(chǎng)上購買。
抗原特異性 Ig ELISA 的典型設(shè)置(圖 2)包括以下步驟:
如果您正在建立全新的檢測(cè),請(qǐng)注意抗原上的相關(guān)表位可能在包被步驟后被隱藏。如果您懷疑隱藏表位是 ELISA 無效的原因,您可以嘗試不同的包被方案。例如,您可以測(cè)試不同的包被緩沖液,例如 PBS 7.4 或碳酸氫鹽緩沖液 pH 9.5,因?yàn)?pH 值會(huì)影響氨基酸側(cè)鏈和聚苯乙烯之間的疏水結(jié)合。或者,如果您有標(biāo)記格式的抗原,您可以測(cè)試反向 ELISA 設(shè)置(圖 1C)。
圖 2.抗原特異性免疫球蛋白 ELISA,使用 A)一步檢測(cè)的直接ELISA 或 B)兩步檢測(cè)的 間接ELISA。
抗原特異性免疫球蛋白檢測(cè)的應(yīng)用
典型的夾心測(cè)定設(shè)置可用于檢測(cè)相同同種型(也稱為類)或相同抗體亞類的抗體(圖 1C、圖 3)。為此,您需要一對(duì)特異于 Ig Fc 部分(抗體骨架)的匹配抗體對(duì),以區(qū)分同種型或亞類。將捕獲抗體包被到 ELISA 板后,樣品中的 Ig 將被特定包被 mAb 捕獲,然后在下一步中被檢測(cè)抗體夾在中間。由于 Ig 同種型通常在血液樣本中含量豐富,因此一步檢測(cè)設(shè)置(圖 3A)可能優(yōu)于兩步檢測(cè)(圖 3B),因?yàn)椴恍枰盘?hào)放大。IgE 是一個(gè)例外,由于其在人體中的豐度較低,因此應(yīng)使用兩步 ELISA 進(jìn)行分析。
圖 3.使用 A) 一步檢測(cè)或 B) 兩步檢測(cè),通過夾心 ELISA 檢測(cè)總免疫球蛋白同種型或亞類。
抗免疫球蛋白 ELISA 的應(yīng)用
圖 4.抗原特異性 Ig ELISA 應(yīng)用示例。在加強(qiáng)注射之前和之后使用 ELISA 測(cè)量破傷風(fēng)類毒素 (TT) 特異性 Ig。在接種 Covaxis(一種包含 TT 的聯(lián)合疫苗)加強(qiáng)劑量之前和之后兩周,收集了來自四位不同捐贈(zèng)者的血漿樣本。將血漿樣品稀釋 10,000 倍(IgG、IgM)、1,000 倍(IgG1)或 100 倍(IgG2、IgG3、IgG4),并使用同種型或亞類特異性檢測(cè)抗體檢測(cè) TT 特異性 Ig 的結(jié)合。
提示!
如果您在同一塊板上結(jié)合同種型檢測(cè)和抗原特異性檢測(cè),請(qǐng)注意 ELISA 方案的差異。