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ELISAKIT的基本組成和操作流程

發(fā)布時間:2023-11-10     發(fā)布作者:上海通蔚生物

   elisa試劑盒對于搞科研的人來說還是比較神秘,elisa試劑盒來的時候就是一個盒子,這個盒子到底有什么神奇的地方呢?又有哪些部分組成?具體操作流程有哪些?下面跟隨上海生蔚一起來了解一下吧!

  ELISAKIT的基本組成


elisa試劑盒組成

elisa試劑盒


  酶標板:用于抗原-抗體復合物的孵育和洗滌。

  酶標抗體:與待測樣本中的抗原特異性結合的抗體,通常采用辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)標記。

  酶標二抗:與酶標抗體結合的特異性抗體,用于增強信號。

  底物:用于顯色反應的化學物質,如TMB(四甲基聯(lián)苯胺)或ABTS(二氨基聯(lián)苯胺)。

  終止液:用于停止顯色反應的液體,通常是硫酸。

  洗滌液:用于清洗酶標板上的未結合物質。

  說明書:包含操作指南和注意事項。

  ELISAKIT操作流程


eliasa試劑盒操作流程

elisa試劑盒操作步驟


  準備工作:將所需試劑從冰箱中取出,恢復至室溫。準備一塊干凈的酶標板,根據實驗設計設置合適的孔數和加樣位置。

  加樣:根據說明書要求,將待測樣本和標準品加入酶標板上的相應孔中。通常采用自動加樣器或手工滴加。

  孵育:將酶標板封閉后,在恒溫條件下孵育一定時間,使抗原-抗體復合物形成。

  洗滌:用洗滌液清洗酶標板,去除未結合的物質。

  加酶標抗體:將酶標抗體加入酶標板上的相應孔中,封閉后再次孵育。

  洗滌:用洗滌液清洗酶標板,去除未結合的酶標抗體。

  加底物:將底物加入酶標板上的相應孔中,孵育一定時間后顯色。

  終止反應:用終止液停止顯色反應。

  檢測:用酶標儀讀取各孔的光密度值,記錄數據并進行分析。

  數據處理與分析:根據所得數據計算待測樣本的濃度或活性。可以參考說明書提供的標準曲線或計算公式進行計算。

  結果報告:根據實驗目的和要求,撰寫實驗報告并提交結果。

 上海通蔚提醒,在使用ELISA試劑盒時,需要注意以下操作事項:

  仔細閱讀試劑盒說明書,了解試劑盒的原理、操作步驟和注意事項。

  實驗室環(huán)境應保持清潔,避免污染試劑盒。

  所有試劑在操作前需要充分混勻,避免沉淀或分層。

  加樣時,應按照說明書要求,使用自動加樣器或手工滴加。

  孵育時間應按照說明書要求進行,以確保抗原-抗體復合物充分形成。

  洗滌要充分,每孔洗液加樣過少或殘留都會導致顯色過快,同時背景較高。

  手洗板時所用槍頭懸空加入洗液,避免洗液污染。

  剩余酶標板條應及時放入干燥袋,避免受潮。

  試劑盒保存條件應嚴格按照說明書要求進行,過高的溫度或過低的冷藏溫度都會導致試劑盒敏感性下降。

上述是上海通蔚介紹的ELISA試劑盒的基本組成和操作流程,在操作試劑盒過程務必要注意事項,避免導致實驗過程導致讀數出現(xiàn)誤差。
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