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【通蔚生物】: 間接法操作elisa試劑盒

發(fā)布時(shí)間:2021-07-20     發(fā)布作者:上海通蔚生物

間接法可用于檢測(cè)未知抗體的elisa試劑盒

elisa試劑盒步驟如下:
1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜;
2.第二日日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌; 最后一遍用DDW洗滌。elisa試劑盒
6.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
7.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
8.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。elisa試劑盒

操作以上步驟完畢后,就可以知道結(jié)果了。

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