發(fā)布時(shí)間:2021-10-20 發(fā)布作者:上海通蔚生物
雙抗體夾心法ELISA
夾心法原理:
用特異性抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的特異性抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。生物素化的特異性抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中抗原的濃度。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,通過反應(yīng)也結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。