一、白板
如果顯色完成后,肉眼可見整板沒有顯示反應(yīng),可能原因及應(yīng)對方法是什么呢?通蔚生物整理了可能的原因,希望對您有幫助。
解決方案:
1,試劑盒儲存不當(dāng);不同
ELISA試劑盒試劑混用購買新的試劑盒,注意儲存條件;不可混用
2,孵育溫度低,時間短如果溫度偏低,則延長孵育時間和顯色時間。
3,錯加、漏加試劑嚴(yán)格按照說明書步驟添加正確試劑。
4,用于配置溶液的容器不干凈,或水有問題使用干凈容器以及合格的蒸餾水。
5,檢測抗體和/或HRP濃度太低參照說明書,不可隨意稀釋。
6,試劑溫度不均一所有試劑要室溫平衡 30 min。
7,洗板過程中浸泡時間長,洗板次數(shù)太多,洗板沖擊力大,嚴(yán)格按說明書操作。
二、花板
花板是指空白、陰性、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的吸光度(OD值)卻明顯偏高,可能原因及應(yīng)對方法詳見下表。
1,洗滌次數(shù)少,不充分按說明書要求洗滌。
2,底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)被金屬離子或氧化劑污染或曝光配置時使用干凈容器以及合格蒸餾水;避光保存。
3,孵育溫度高和/或時間過長控制孵育和最后酶促反應(yīng)的溫度和時間。
4,ELISA試劑盒加樣時未更換槍頭,造成交叉污染每個樣都更換槍頭。
5,附近孔交叉污染洗滌時,洗液不可溢出孔洞,垂直拍板;使用合適的拍板紙,避免孔內(nèi)進入紙屑塵渣;孵育時封板要嚴(yán)密,防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)。
6,樣本存在內(nèi)源性干擾物質(zhì)推測可能的感染物質(zhì),并進行對應(yīng)處理。
7,樣本溶血、貯存過久、凝集不全、被細菌污染、采血管中添加物影響等避免溶血、污染、過久儲存等現(xiàn)象。