免疫測定是使用抗體來檢測和測量生物樣本（例如血液、尿液或唾液）中的各種物質的實驗室測試。它通常用于臨床診斷、藥物發現和基礎研究，以檢測激素、藥物、蛋白質和傳染源等。一些最常用的免疫測定法包括酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、熒光免疫測定法(FIA)和化學發光免疫測定法(CLIA)。

圖1、ELISA實驗

  

  免疫分析技術已廣泛應用于藥物分析的各個關鍵領域，例如疾病診斷、治療藥物監測、臨床藥代動力學研究以及藥物發現和制藥行業的生物等效性研究。

  

  ELISA 與其他免疫測定法的比較

  

   一、放射免疫分析（RIA）

  

  放射免疫測定（RIA）是一種使用放射性標記抗原來測量體液中物質濃度的技術。放射性同位素附著在抗原上并與其互補抗體結合。具有目標抗原的樣品與放射性抗原競爭并取代它。測量樣品的放射性信號，其強度與目標抗原濃度成正比。 RIA 需要含有抗原、互補抗體和放射性標記抗原的樣品。

  

  免疫測定依賴于與一種免疫分析試劑（例如分析物或抗體）連接的可檢測標記，例如放射性同位素或酶。這些標記在免疫測定中的結合導致了檢測限非常低的高靈敏度檢測系統的開發。

  

   圖 2 包括 (A) 與一抗孵育的樣品肽。 (B) 然后添加放射性標記的肽。它與樣品肽競爭并取代它。 (C) 二抗與一抗結合并使其從溶液中沉淀出來。 (D) 離心導致抗體-抗原復合物形成沉淀。 (F) 典型標準曲線示例。 (G) 尾加壓素-II (UII) 的實際標準曲線，其中結合的放射性碘量表示為 B/B0，它是每個標準濃度下的結合量 B 與不存在置換劑時的結合量 B0 的比率。生物樣本中的分析樣品應位于曲線的直線部分。

  

  優點：

  

  1、高靈敏度和特異性，可準確檢測和定量復雜生物樣品中低水平的目標分子

  

  2、適用于多種分析物，包括激素、藥物和傳染源。

  

   缺點：

  

  1、使用需要特殊處理和處置程序的放射性物質。

  

  2、專業設備和技術專長會導致更高的成本和時間消耗。

  

  3、被其他更安全、更易于使用的免疫測定技術所取代。

  

  與ELISA比較

  

  1、RIA 使用放射性標記，而 ELISA 使用酶標記。

  

  2、RIA 更靈敏，但需要特殊處理且更昂貴，而 ELISA 更安全、更快速且更具成本效益。

  

  3、RIA 更適合檢測復雜生物液體中的低水平抗原或抗體，而 ELISA 更適合快速檢測大量樣品。

  

  4、檢測方法的選擇取決于實驗的具體需求，例如靈敏度、成本和安全性。

  

  二、熒光免疫分析 (FIA)

  

  FIA 是一種使用熒光化合物來檢測和測量不同化合物的技術。與其他方法相比，它具有高度靈敏和快速的特點，使其成為體外診斷領域的熱門選擇。

  

  在 FIA 中，熒光探針用于標記抗體，抗體在紫外線下發光以檢測特定的抗原抗體結合。然后分離抗原-抗體復合物并測量熒光強度。

  

  進行了一項研究，使用三種競爭性測定法降低食品中酪蛋白的檢測限：直接和間接 TR-FIA 以及 ELISA。兩種 TR-FIA 的靈敏度均遠低于 ELISA。然而，所有三種測定方法都可以對食品中的酪蛋白進行 1-1.5 mg kg?1的定量，為更嚴格的驗證和協作測試提供了基礎。 TR-FIA 方法沒有比 ELISA 提供任何改進。

  

   優點：

  

  1、快速且高度靈敏地檢測和定量化合物

  

  2、使用特異且高靈敏度的熒光化合物作為檢測試劑

  

  3、可用于不同的環境，包括體外診斷

  

  缺點：

  

  1、需要專門的熒光檢測設備

  

  2、與其他方法相比，檢測動態范圍有限

  

  3、樣品基質和自發熒光可能會產生干擾。

  

  與ELISA比較

  

  使用 TRFIA（時間分辨熒光免疫分析）和Eu3+ 螯合物標記的單克隆抗體檢測環境水中的痕量磺胺類藥物。該方法具有低檢測限和高選擇性，并且能夠耐受pH、鹽度和其他物質存在的變化。 TRFIA 具有成本效益、樣品通量高、無需預處理即可使用。研究表明，TRFIA 是一種很有前景的環境水中磺胺類藥物常規篩查方法，與現有方法相比具有優勢。

  

  三、化學發光免疫分析 (CLIA)

  

  CLIA 使用化學反應來產生光并檢測目標分子的存在。將特定抗原或抗體固定在固體支持物上，然后添加化學發光底物以及與目標分子結合的二抗。

  

  基于磁珠的 CLIA 是一種變體，它使用涂有特定抗原或抗體的磁珠，這些磁珠通過磁性納米粒子進行功能化，可以有效地將目標分子從樣品中分離出來。

  

  用于檢測寨卡病毒的磁驅動化學發光檢測使用帶有針對該病毒的特異性抗體功能化的磁珠，將其置于磁場中以提高檢測的靈敏度。

  

  化學發光免疫分析 (CLIA) 的優點包括：

  

  1、高靈敏度和特異性：CLIA可以檢測極低濃度的目標分子，假陽性和假陰性率低。

  

  2、寬動態范圍：CLIA 可以測量目標分子的各種濃度，從非常低到非常高。

  

  3、靈活性：CLIA可用于檢測多種不同的靶分子，包括蛋白質、核酸和小分子。

  

  4、自動化：CLIA 可以輕松實現自動化，使其成為一種方便高效的高通量分析技術。

  

  5、穩定性：與其他免疫測定技術相比，CLIA 產生的化學發光信號穩定，可以在更長的時間內進行測量。

  

   化學發光免疫分析 (CLIA) 的缺點包括：

  

  1、成本：CLIA 試劑和儀器可能很昂貴，這可能會限制它們在某些應用中的使用。

  

  2、復雜性：CLIA 需要專門的設備和專業知識，這使得在一些實驗室中難以實施。

  

  與ELISA比較

  

  這兩種免疫測定法已證明其分析具有一致性，但定量結果存在差異，這可能歸因于使用不同的標準校準品。盡管 CLIA 測試顯示所獲得的值波動較大，但它是有益的，因為它是一個自動化過程，并且等待時間短。因此，兩種免疫測定可以互換使用，以精確測定樣品中的抗 HBs 水平。

  

   結論

  

  總之，ELISA 是一種經濟有效且廣泛使用的方法，但在敏感性和特異性方面可能存在局限性。 RIA 靈敏度高，但價格較高，并且由于使用放射性同位素而帶來安全問題。 CLIA 高度靈敏、特異、自動化且周轉時間短，使其成為臨床實驗室的熱門選擇。