上篇給大家講過《常見細胞基培養有哪些種類》，細胞培養基是細胞不可缺少的部分。今天圍繞細胞培養，小蔚給結合自己多年的經驗給大家講講細胞培養的步驟。讓各位科研小伙伴在實驗室也能順利實驗。

  細胞培養的步驟

  第一步：需要將超凈臺及所用儀器耗材進行紫外線滅菌，時間為30分鐘。然后我們打開水浴鍋預熱至37度。將培養基放入37度的培養箱或水浴鍋預熱。

  第二步：從夜氮罐中取出凍存細胞，然后將凍存細胞放置-80度的冰箱等5-10分鐘。將細胞至于冰箱讓管內液氮蒸發后再進行水浴可以避免水浴過程中發生安全事故。

  第三步：用37度水浴快速融化細胞，待凍存細胞融化至僅有米粒大小冰塊時停止水浴，融化時間通常在1分鐘左右。這里建議將凍存的細胞裝在透明的PE手套中進行水浴，這樣可以有效避免水浴帶來的污染。

  第四步：將凍存管在150g條件下離心1-2min，注意參數約為90-1000rpm，不同離心機可能有差異，需提前設置好。

  第五步：打開超凈臺取出預熱好的培養基，然后用酒精噴灑消毒后放入超靜臺內，隨后在培養瓶內加10毫升培養基。

  第六步：離心完成后取出凍存的細胞，用酒精擦拭消毒后小心開啟凍存管，棄上清，取細胞沉淀重懸后接種至培養瓶內，注意重懸吹打細胞力度不要過大，用十字法或八字法混勻細胞。

  第七步：鏡檢確認細胞均勻分布在培養基后將細胞放置培養箱培養。

  細胞培養注意事項

  1、細胞培養要遵循安全標準以在實驗室中保護自己。需要個人防護裝備（實驗室外套、實驗室手套、安全眼鏡）。特別是，在處理液氮時，請務必遵守各實驗室制定的規定，例如使用特殊的絕緣手套、全臉面罩、防濺圍裙和手套。另外，為了防止頭發污染，最好將長發扎起來或戴上帽子。

  為避免空氣傳播細菌，請將正常實驗和組織培養的實驗服和鞋分開，并避免污染培養室環境。通過穿著不同顏色的夾克或實驗室外套更容易區分它們。

  2、實驗環境的準備。始終保持超凈工作臺、工作臺以及其他處理細胞的區域周圍區域的清潔。避免將紙板等包裝物放置在進行細胞培養的區域。請務必定期檢查和清潔培養箱、超凈工作臺、離心機、顯微鏡等，保持清潔。定期使用SigmaClean®清潔水浴。

  所有使用的材料，如試劑、燒瓶和培養基，都應貼上標簽或標明日期和內容，以明確里面的內容。另外，使用前請務必檢查所用培養基和試劑的質量。每天檢查培養基是否有細菌或真菌污染的跡象。即使您購買了市售的培養基，也請務必進行此項檢查。

  所有與細胞直接接觸的培養箱、培養設備、培養基等必須無菌，防止微生物污染。因此，所有使用過的物品都必須進行滅菌或消毒。

  一般用于消毒的酒精有效濃度為乙醇70%左右，異丙醇60-70%左右，通過脫水凝固進行消毒。乙醇對大多數病毒有效（不適用于沒有外殼的病毒），異丙醇對病毒無效。

  滅菌主要有三種：高壓滅菌、干熱滅菌和過濾滅菌。

  3、在實際操作過程中，還有一些需要注意的地方。嘗試一次僅使用一種類型的細胞系。這降低了交叉污染和錯誤標簽的風險。此外，如果超凈工作臺中發生細菌或支原體的氣溶膠傳播，受影響的瓶子和燒瓶也會減少。

  在操作之間使用合適的消毒劑（例如 70% 乙醇）對工作表面進行消毒，并在處理不同細胞系之間等待至少 15 分鐘。培養過程中，每個細胞系的培養基瓶盡可能遠離。應定期檢測細胞是否有支原體感染。

  上述為大家介紹細胞培養過程步驟及注意事項，希望上述文章對大家有所幫助。如果您對細胞培養過程還有疑問，可以和我們溝通。上海通蔚可以產品有細胞，如果想了解了解細胞系，歡迎前來咨詢。