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ELISA實(shí)驗(yàn)常見樣本—細(xì)胞

發(fā)布時(shí)間:2024-01-31     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  在科研實(shí)驗(yàn),ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等。今天由上海通蔚生物來介紹一下樣本細(xì)胞。


細(xì)胞


  細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。

  •   如果目的物所是分泌型,存在于細(xì)胞之外的話,即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。
  •   胞培養(yǎng)上清處理方法:取細(xì)胞培養(yǎng)上清,1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。

  目的物是存在于細(xì)胞內(nèi),則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本。細(xì)胞裂解液處理方法如下:

  1.   貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化,離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);
  2.   將收集到的細(xì)胞用冷PBS洗3次;
  3.   物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞,再反復(fù)凍融):
  4.   超聲破碎:取適量PBS重懸細(xì)胞,用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂;
  5.   反復(fù)凍融:將待破碎的細(xì)胞在-20℃以下冰凍,室溫融解,反復(fù)3次,使細(xì)胞溶脹破碎;
  6.   將標(biāo)本于2-8度1500×g離心10分鐘,收集上清備用。

  細(xì)胞裂解液處理過程中,物理方法更優(yōu)異于化學(xué)方法,化學(xué)方法會(huì)引入酸或堿,可能會(huì)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。利用化學(xué)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,如果去污劑成分會(huì)干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測(cè)效果,推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

  樣本保存事項(xiàng):


  在處理樣本過程就是收集目標(biāo)蛋白,由于這些目標(biāo)蛋白容易變性,降解,該過程要盡量的溫和。贗本處理之后存儲(chǔ)也非常重要,不要反復(fù)凍融,處理后的樣本盡量密封保存,保存溫度在4°保存要小于一周,-20°保存要小于1個(gè)月,-80°保存要小于2個(gè)月。

  上述是上海通蔚為大家介紹ELISA實(shí)驗(yàn)常見樣本細(xì)胞處理方法,希望對(duì)大家有所幫助!上海通蔚生物有ELISA試劑盒,靈敏度高,易用受廣大科研者青睞,歡迎選購(gòu)。
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