發(fā)布時間:2024-04-15 發(fā)布作者:上海通蔚
ELISA實驗會用到哪些試劑?在ELISA中常用到的試劑包括包被液 、封閉液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液 、酶標(biāo)抗體、底物和終止液。接下來,上海通蔚就elisa實驗所需試劑詳細(xì)說明。
在介紹試劑之前,我們先簡單了解下elisa基本原理。elisa基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),將待測樣品中的抗原或抗體與酶標(biāo)記的抗體或抗原結(jié)合,再通過洗滌和顯色等步驟,對待測樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定量或定性分析。詳情ELISA檢測試劑盒,可以參考《ELISA檢測試劑盒:原理、步驟和操作指南》
包被液。Elisa實驗第一步就是包被,即將抗原或抗體固定在酶標(biāo)板上,以便后續(xù)的抗原抗體反應(yīng)。包被液用于將抗原或抗體吸附到酶標(biāo)板上,通常是碳酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液。包被液作用:
1、提供合適的pH和離子強(qiáng)度環(huán)境:包被液通常是碳酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液,可以提供合適的pH和離子強(qiáng)度環(huán)境,促進(jìn)蛋白質(zhì)與聚苯乙烯表面的結(jié)合。
2、提高蛋白吸附效率:一些包被液中可能含有額外的成分,例如蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑或表面活性劑,可以進(jìn)一步提高蛋白質(zhì)的吸附效率和穩(wěn)定性。
封閉液。在包被之后,立即使用效果較好的封閉液(如細(xì)胞培養(yǎng)級BSA、Tween等)封閉非特異性抗體。用于封閉酶標(biāo)板上未被抗原或抗體占據(jù)的位點,減少非特異性結(jié)合。
洗滌緩沖液。用于洗去未結(jié)合的物質(zhì),降低背景信號,讓您的信號更加清晰,通常是 PBS (磷酸鹽緩沖液) 或 Tris 緩沖液,可能含有 Tween-20 等去污劑??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
酶標(biāo)抗體。在elisa實驗中,與目標(biāo)抗原或抗體特異性結(jié)合,并帶有酶標(biāo)記,例如辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)。
底物。與酶標(biāo)抗體上的酶反應(yīng),酶會催化底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的信號,例如顏色變化或發(fā)光。通過檢測信號的強(qiáng)度,我們可以定量樣品中的目標(biāo)蛋白(抗原或抗體)。
終止液。用于終止酶-底物反應(yīng),例如酸性溶液或 EDTA 溶液。終止液有兩方面作用:一是終止液破壞了HRP酶的活性,使酶的催化功能喪失,中止反應(yīng),使得讀數(shù)相對穩(wěn)定,輕易控制;
二是終止液使酶失活的同時,使得pH降低,顯色底物的特征吸收波長發(fā)生變化,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù)。
ELISA是一種靈敏的檢測方法,用于檢測樣品中特定抗原或抗體的存在。為了保持ELISA試劑盒的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性,正確的保存方法非常重要。以下是ELISA試劑盒保存方法的一些建議:
1.避免反復(fù)凍融
ELISA試劑盒中包含的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融會破壞酶的活性,導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。因此,在儲存過程中,應(yīng)將ELISA試劑盒放在冰箱冷凍室中,使用時取出,并在室溫下融化。
2.低溫保存
ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)在低溫下保存。通常建議將它們保存在2-8℃的冰箱中。低溫可以保持酶的活性和穩(wěn)定性,延長試劑盒的保質(zhì)期。
3.干燥保存
ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)避免潮濕。過高的濕度會導(dǎo)致酶標(biāo)板變形、變質(zhì),影響檢測結(jié)果。因此,在儲存過程中,應(yīng)將ELISA試劑盒放在干燥、通風(fēng)的地方,避免直接暴露在空氣中。
4.避免陽光直射
ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)避免陽光直射。陽光中的紫外線會破壞酶的活性,導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。因此,在儲存過程中,應(yīng)將ELISA試劑盒放在避光的地方,如抽屜或柜子里。
5.按說明書要求儲存
不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒可能有不同因的此儲,存在要使求用。試劑盒前,應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,了解該試劑盒的儲存方法和注意事項。嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行儲存可以保證試劑盒的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。
上述ELISA試劑實現(xiàn)了ELISA檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。了解ELISA檢測試劑盒的組成部分及其作用有助于更好地理解和應(yīng)用該技術(shù)在科研領(lǐng)域的重要性。