酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是一種常見的免疫實驗技術(shù)。科研工作者可以用它來檢測樣本中特定抗原或抗體。ELISA基本原理相對簡單，但是整個實驗涉及多個步驟，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。以下是ELISA實驗步驟：

圖1 ELISA實驗步驟（圖片來源網(wǎng)絡(luò)）

  1.樣本準(zhǔn)備。需要準(zhǔn)備好待檢測的樣本，這些樣本包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。樣本的收集和保存要符合實驗的要求。相關(guān)閱讀：《酶聯(lián)免疫吸附實驗：ELISA樣本處理、收集和保存》

  2.加樣。將樣本和對照品加入到ELISA板指定的孔中。這一步確保加樣準(zhǔn)確性和一致性。

  3.孵育。加樣之后，需要將ELISA板放入指定的溫度（37度）下進行孵育，讓抗原和抗體與固定的板上的抗體或抗原結(jié)合。

  4.洗滌。孵育之后，需要通過洗滌去除未結(jié)合的成分，以減少非特異性背景信號。這一步要確保洗滌的徹底性和一致性。

  5.酶標(biāo)抗體孵育。在洗滌之后，需要加入酶標(biāo)抗體（通常是辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體），結(jié)合已結(jié)合的抗原和抗體。然后再次進行孵育和洗滌操作。

  6.底物反應(yīng)。加入底物溶液，酶會催化底物發(fā)生反應(yīng)。顏色的深淺和樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量成正比。

  7.讀取結(jié)果。通過酶標(biāo)儀讀取ELISA板各孔的光密度（OD）值，計算出樣本目標(biāo)物質(zhì)含量。

  從上述步驟可以看得出ELISA操作步驟看似簡單，但是每個步驟細(xì)節(jié)要嚴(yán)格的把控，任何一個環(huán)節(jié)的失敗都可能導(dǎo)致結(jié)果的偏差或錯誤。對于初學(xué)者，通蔚建議有經(jīng)驗的實驗人員指導(dǎo)下進行。