發布時間:2024-04-03 發布作者:上海通蔚
ELISA 代表酶聯免疫吸附測定。 ELISA 有多種類型,包括夾心 ELISA、間接 ELISA、直接 ELISA 和競爭ELISA,所有這些都用于檢測抗體。那么,為什么 ELISA 三明治檢測與流行的午餐菜單項目相關呢?它被稱為三明治,因為它使用兩種抗體,它們之間結合有抗原(有點像三明治),不過在常規的叫法中,我們叫它夾心ELISA。請繼續閱讀,了解有關 ELISA 夾心測定的更多信息、它與其他類型的不同之處以及其過程是什么樣的。同時我也會給你介紹一下它能否檢測大腸桿菌。關于elisa試劑盒類型,可以參考這篇文章《elisa試劑盒有哪幾種類型?elisa四類型圖解》
任何 ELISA 都用于發現樣本中的目標抗原。然而,在夾心測定中,抗原結合在檢測抗體和捕獲抗體之間。一般來說,捕獲抗體固定在微孔板上。相反,檢測抗體(與酶或熒光團標記結合)作為檢測前的最后一步應用。與其他 ELISA 類型相比,夾心法更具特異性和敏感性,更適合更復雜的情況。
在大多數情況下,夾心測定過程如下:
1、涂上捕獲抗體。表面可以是磁珠或多孔板。孵育后,應清洗未結合的抗體以提高靈敏度。
2、阻止表面上未結合的蛋白質結合面。使用封閉緩沖液,例如牛血清白蛋白 (BSA)、酪蛋白或胎牛血清 (FBS),有助于減少背景和非特異性結合。
3、添加目標抗原(樣品)。首先孵育,使目標抗原能夠與捕獲抗體結合。然后,洗滌以除去未結合的抗原。
4、添加檢測抗體標記結合物。然后,孵育并洗滌。
5、檢測。測量吸光度、熒光、顯色或化學發光讀數。
夾心檢測的最大優點是其靈敏度(也稱為檢測限)。如果您的一抗和二抗對具有高親和力和特異性,則靈敏度會顯著提高。
夾心測定的一個缺點是二抗可能會產生錯誤的讀數,因為一抗和二抗不具有高特異性和親和力。在這種情況下,二抗可能會與捕獲抗體結合,從而給出錯誤的讀數。如果想了解一抗和二抗,可以參考《科研實驗必備知識:一抗與二抗的區別》
大腸桿菌是一種細菌,具有特定的抗原決定簇。如果我們可以獲得針對這些抗原決定簇的特異性抗體,那么理論上是可以使用夾心法ELISA來檢測大腸桿菌的。實際上,已經有研究報道了使用夾心法ELISA來檢測大腸桿菌或其相關抗原的方法[1]。
如果你打算進行這方面的研究,建議查閱相關的文獻報道,以獲取更詳細的信息和實驗指導。當然也可以咨詢我們在線ELISA顧問,我們也可以為您提供這方面的試劑盒檢測服務。
參考文獻和注釋
Kerr P、Chart H、Finlay D 等人。動物和人大腸桿菌O157菌株單克隆夾心ELISA檢測方法的建立[J].應用微生物學雜志, 2001, 90(4): 543-549。【谷歌學術】