在基本的細胞培養操作中，為了防止污染并安全地進行實驗，您應該做一些事情，不應該做一些事情。不僅包括適用于其他研究領域的一般事項，還包括細胞培養的具體預防措施。在本文的前半部分，我們將解釋細胞培養基本操作的注意事項。正確管理實驗環境和儲存材料不僅對您自己的研究很重要，而且還能避免打擾其他實驗室成員。請仔細閱讀并用于您的實驗。

 

  我們還將在本文后面討論細胞培養中的無菌技術。我們整理了您需要采取的預防措施清單，以防止細菌、真菌、支原體等引起的交叉污染，請也參考一下。

 

  細胞培養中應該做什么

 

  首先，我們來檢查一下實驗者本人的著裝。始終遵循安全標準以在實驗室中保護自己。需要個人防護裝備（實驗室外套、實驗室手套、安全眼鏡）。特別是，在處理液氮時，請務必遵守各實驗室制定的規定，例如使用特殊的絕緣手套、全臉面罩、防濺圍裙和手套。另外，為了防止頭發污染，最好將長發扎起來或戴上帽子。

 

  為避免空氣傳播細菌，請將正常實驗和組織培養的實驗服和鞋分開，并避免污染培養室環境。通過穿著不同顏色的夾克或實驗室外套更容易區分它們。

 

  接下來說一下實驗環境的準備。始終保持超凈工作臺、工作臺以及其他處理細胞的區域周圍區域的清潔。避免將紙板等包裝物放置在進行細胞培養的區域。請務必定期檢查和清潔培養箱、超凈工作臺、離心機、顯微鏡等，保持清潔。

 

  所有使用的材料，如試劑、燒瓶和培養基，都應貼上標簽或標明日期和內容，以明確里面的內容。另外，使用前請務必檢查所用培養基和試劑的質量。每天檢查培養基是否有細菌或真菌污染的跡象。即使您購買了市售的培養基，也請務必進行此項檢查。

 

  所有與細胞直接接觸的培養箱、培養設備、培養基等必須無菌，防止微生物污染。因此，所有使用過的物品都必須進行滅菌或消毒。

 

  一般用于消毒的酒精有效濃度為乙醇70%左右，異丙醇60-70%左右，通過脫水凝固進行消毒。乙醇對大多數病毒有效（不適用于沒有外殼的病毒），異丙醇對病毒無效。

 

  滅菌主要有三種：高壓滅菌、干熱滅菌和過濾滅菌。

 

  接下來，在實際操作過程中，還有一些需要注意的地方。嘗試一次僅使用一種類型的細胞系。這降低了交叉污染和錯誤標簽的風險。此外，如果超凈工作臺中發生細菌或支原體的氣溶膠傳播，受影響的瓶子和燒瓶也會減少。

 

  在操作之間使用合適的消毒劑（例如70%乙醇）對工作表面進行消毒，并在處理不同細胞系之間等待至少15分鐘。培養過程中，每個細胞系的培養基瓶盡可能遠離。應定期檢測細胞是否有支原體感染。

 

  細胞培養時不要做什么

 

  培養細胞時應避免的事項是：

 

  首先，盡可能避免在培養基中連續添加抗生素。抗生素抗藥性細菌更有可能出現，污染也變得更難以識別。然后，每次處理廢物，避免在培養箱或超凈工作臺中留下任何廢物。

 

  確保不要太多人同時進入實驗室也很重要，以避免細菌污染空氣。此外，來源不明的細胞不應在主細胞培養室中處理。隔離處理這些細胞，直到完成質量控制檢查。

 

  培養的細胞達到100%匯合也是不希望的。避免讓細胞培養達到100%匯合（匯合：細胞覆蓋培養容器的表面）。始終以70-80%匯合度或根據細胞隨附的數據表進行培養。

 

  最后，避免使用過期的培養基。培養基的使用期限通常約為4至6個月（如果保存在4°C且含有谷氨酰胺和血清）。

 

  防止污染的無菌技術

 

  接下來，我們將解釋防止細菌、真菌、支原體等交叉污染的標準預防措施。每個實驗室都有自己獨特的程序，因此請參閱每個實驗室的協議以了解詳細信息。

 

  必要的設備和試劑

 

  70%(v/v)乙醇

 

  甲酚皂溶液

 

  合適的消毒劑

 

  <上班前的注意事項>

 

  進行任何工作之前，請用甲酚皂徹底洗手。

 

  使用70%乙醇徹底擦拭超凈工作臺。

 

  用70%乙醇噴灑實驗室手套并將它們摩擦在一起。

 

  開始工作前，將所有材料和設備放置在潔凈的工作臺上。用70%乙醇擦拭潔凈工作臺設備和細胞培養用設備（中瓶、移液器等）。

 

  <工作時的注意事項>

 

  在超凈工作臺內工作時，避免觸摸工作臺內以外的任何物體（尤其是臉部和頭發）。如果發生接觸，請用70%乙醇噴灑手套并徹底擦洗。

 

  在超凈工作臺上慢慢地工作，不要著急。通過慢慢地這樣做，您可以使超凈工作臺內的空氣流通。

 

  潔凈工作臺前嚴禁說話、打噴嚏、咳嗽。

 

  <下班后的筆記>

 

  丟棄用于培養的實驗室手套，以防止污染。

 

  所有設備和試劑在從超凈工作臺上移出之前均經過滅菌。用70%乙醇擦拭工作表面。

 

  將用吸引器吸出的培養基收集到裝有滅菌溶液的收集器中，并收集其他設備和溶液，在高壓滅菌器中滅菌，然后清洗或處理。

 

  定期用消毒劑清潔超凈工作臺內部或遵循制造商的說明。

 

  以上，我們解釋了細胞培養時的注意事項以及細胞培養前的無菌操作。培養細胞時需要注意的事項有很多，可能看起來很難上手，但如果遵循基礎知識，其實并沒有那么困難。仔細進行實驗，檢查每項操作和需要記住的要點。