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小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒制備方法

發布時間:2022-06-28     發布作者:上海通蔚生物

骨髓單細胞懸液的制備方法

小動物骨髓的采集:

1. 處死動物,無菌提取股骨和脛骨,剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔(注意盡可能少的剪走骨髓腔)。

2. 1ml的無菌注射器,吸取少量的含有10%標準胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養基,沖洗骨髓腔以獲得骨髓。

3. 終制備成2×1081×109/ml 的單細胞懸液備用。

 

大動物骨髓的采集:

大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法:先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊,右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入,輕輕左右旋轉將穿刺針鉆入,當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。連接注射器緩慢抽吸骨髓組織,當注射器內抽到少許骨髓時即停止抽吸。用含10%標準胎牛血清的稀釋液調整細胞濃度為2×1081×109/ml 的單細胞懸液備用。

 

常用的骨髓穿刺點:

股骨:穿刺部位在股骨內側面,靠下端的凹面處;

胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處;

肋骨:穿刺部位是第57肋骨各點的中點;

脛骨:穿刺部位是股骨內側、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結束后要用膠布封貼穿刺孔,防止發生氣胸。

 

注意事項:

A. 開封顛倒混勻,本分離液為無菌產品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免微生物污染。。

B. 分離液使用時應始終保持室溫(18~25℃),如室內溫度較低,可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。

C. 洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液,其成分會導致血細胞凝集,大大降低細胞得率及純度。

D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導致細胞掛壁,影響分離效果。

E. 如果要進一步對分離的細胞進行培養,那在收集血液和分離過程中,注意無菌操作,避免微生物污染。

F. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同,用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

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