ELISA實(shí)驗(yàn)操作所要求的條件是比較嚴(yán)格的，無論是對(duì)實(shí)驗(yàn)的硬件條件還是對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作人員的技術(shù)要求，都是如此。下面所提到的就是一些在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)所要注意的一些問題。

ELISA實(shí)驗(yàn)18條通用規(guī)則

1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但最好有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。

5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

9、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

10、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

11、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

13、檢測(cè)前，要打開酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

15、待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。

16、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。

17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

18、對(duì)結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。