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ELISA技術支持

ELISA實驗技巧：ELISA（雙抗體夾心法）檢測HBsAg

發布時間：2021-06-11 發布作者：上海通蔚生物

已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標本加入，共同孵育后，抗原結合于包被抗體上，再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs)，酶標抗體連接到抗原上，最后加入底物溶液，根據顏色反應來判定抗原含量。

【材料】

HBsAg試劑盒，本試劑盒含：

1、包被抗-HBs反應條

1瓶

2、酶結合物

1瓶

3、HBSAg陽性對照

1瓶

4、HBsAg陰性對照

1瓶

5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋

1瓶

6、顯色劑(TMB)A

1瓶

7、顯色劑(TMB)B

1瓶

8、終止液

1瓶

【方法】

1、加入待測標本每孔0.05ml，并設HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。

2、洗板:棄去反應條孔內液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復五次后拍干。

3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。

4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。

【結果】

比色法:波長450nm，先用空白孔校零點，然后讀取各孔光密度值。

樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。

備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8，實驗結果有效。

【注意事項】

1、試劑盒置2℃～8℃保存。

2、使用前試劑應搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。

3、從冷藏環境中取出試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應及時封存于冰箱中以備后用。

4、待測標本不可用NaN3防腐。

5、不同批號試劑請勿通用。

6、結果判斷須在10分鐘內完成。

7、若濃縮洗滌液出現結晶時，請置37℃至溶解。

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