發(fā)布時間:2021-06-11 發(fā)布作者:上海通蔚生物
ELISA試劑盒深受廣大科研工作者的喜愛。而且市面上的ELISA試劑盒數(shù)不勝數(shù), 讓大家選擇的時候都比較糾結(jié)。到底怎么選擇試劑盒呢?怎么才能不被紛擾世道的假的試劑盒迷惑雙眼呢?選什么樣的試劑盒才能性價比高呢?
品牌試劑盒隨便一個價錢都是要一千塊以上,如果選錯了試劑盒,輕則損失一筆科研經(jīng)費,重則毀掉整個實驗課題,再重則影響科研事業(yè)的發(fā)展,這個鍋您能背么?不背……
市面上的ELISA Kit質(zhì)量良莠不齊,想要挑選到合適的試劑盒還真不是一件很容易的事情。不背鍋,咱就坐下來,看看如何擦亮雙眼,找對的,不找貴的(當然便宜的更不能找);找好的,不找差的(怎么樣才知道好差呢?)
下面小編“借您借您一雙慧眼吧”跟大家一起把這紛擾看的清清楚楚、明明白白、真真切切!(小板凳搬過來,小編要分享經(jīng)驗咯……)
要從如下幾個方面來甄別挑選合適的ELISA Kit。
如何選擇ELISA試劑盒/挑選ELISA試劑盒
1 查找待測樣本的蛋白濃度:可以通過美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的文獻,Universal Protein(uniprot)上給出的蛋白表達量參考值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致;
2 試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測樣本的種類:除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細胞上清,和細胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用;
3 試劑盒的檢測范圍:也就是標曲范圍,特別要注意待測樣本濃度是否落在標曲范圍內(nèi),對于濃度很高的樣本,可以先進行預(yù)實驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。
4 試劑盒中的稀釋線性及回收率:
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性,是將樣本梯度稀釋下來,看各稀釋梯度濃度是否成線性;參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的最佳稀釋倍數(shù);
b.稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況,加標稀釋線性是將標準品加入樣本中測定加入的標準品濃度測定是否準確;同樣也是確定待測樣本稀釋倍數(shù)的參考指標。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適;
5 試劑盒的其它指標:
靈敏度:試劑盒能夠檢測到的樣本最低濃度的能力,如果待檢指標含量很低,需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒;
6 試劑盒的有效期:試劑盒的有效期一般是半年,樣本準備時間需要考慮到試劑盒的有效期。
品牌最重要的是什么
質(zhì)量是品牌的第一生產(chǎn)力,但在“通蔚生物”眼中,服務(wù)高于一切,服務(wù)真的是非常重要的,尤其是科研領(lǐng)域選產(chǎn)品,產(chǎn)品的售前、售后技術(shù)服務(wù)及時,課題進展及時,科研結(jié)果及時報送,為科研助力就多了一分,時間就是我們科研工作者的成本,并且是大于一切的成本,“通蔚生物”跟時間賽跑,爭取為您的科研事業(yè)多助力,助好力。
選對ELISA Kit只是第一步,要想獲得理想的實驗結(jié)果,還需掌握使用技巧,所以用對了,才能事半功倍!
通蔚生物ELISA試劑盒研發(fā)團隊,歷經(jīng)多年的研發(fā)實踐,總結(jié)了ELISA Kit使用技巧,與您分享。
1 仔細閱讀說明書,熟悉整個流程,推薦畫出簡要步驟圖;提前準備試劑。
2 樣本的準備:盡量使用新鮮樣本,不使用有溶血,被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本,如不能立即測定,5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存,對于1周后檢測的樣本應(yīng)低溫凍存;做好分裝,長時間凍存的樣本避免反復(fù)凍融。
3 不同批次的試劑不要混用,檢查各組分的有效期。
4 預(yù)包被的酶標板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需溫度,預(yù)防后續(xù)實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分,而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5 待測樣本加樣:待檢樣本過多時,建議分批操作;需要稀釋的樣本提前做好稀釋,注意選對合適稀釋液;控制好加樣時間,避免加樣費時過長造成誤差;注意加樣角度,垂直加入孔底,不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
6 溫育和洗板:溫育時間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進行選擇。溫育時可以采用水浴或者濕盒孵育,避免“邊緣效應(yīng)”。①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢。
7 顯色:一般是以雙組份(A:過氧化脲工作液,B液:TMB 工作液)為底物顯色液。反應(yīng)條件為37℃避光孵育15-30min
8 讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析:終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成,讀取OD值時酶標儀需先預(yù)熱15~30 min再進行。數(shù)據(jù)分析一般用四參數(shù)和直線擬合法,選擇哪種擬合方式,可以依據(jù)標曲的相關(guān)系數(shù)(R2)來確定,R2一般大于0.95可用。大于0.99是最佳。
試劑盒是一個很好的科研工具只要選對了、用對了實驗就會事半功倍。
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