發布時間:2024-04-07 發布作者:上海通蔚生物
通蔚生物直鏈淀粉含量試劑盒測定原理介紹如下:
注 意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測定對于評價食品營養價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。測定原理:利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡合物在 620nm 下有吸收峰。
需自備的儀器和用品:酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。
試劑的組成和配制:試劑一:液體 100mL×1 瓶;4℃保存;試劑二:乙醚 100mL×1 瓶;(自備)試劑三:液體 100mL×1 瓶;4℃保存;試劑四:液體 2mL×1 瓶;4℃保存;試劑五:液體 300uL×1 瓶;4℃保存;淀粉提取:稱取 0.01~0.02g 烘干樣本(建議稱取約 0.01g)于研缽中研碎,加入 1mL 試劑一,充分勻漿后轉移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑二(乙醚)振蕩5min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑三充分溶解,90℃水浴 10min,冷卻后待測。
測定步驟:1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 620nm,蒸餾水調零。
測定管:在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 樣本, 14μL 試劑四,120μL 蒸餾水,2μL 試劑五,44uL 蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 測定。空白管:在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 試劑三, 14μL 試劑四,120μL 蒸餾水,2μL 試劑五,44μL 蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 空白。
直鏈淀粉含量計算:a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為 y=1.755x+0.0062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A 測定-A 空白-0.0062)÷Cpr2、按樣本干重計算直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷WV1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,gb. 用 96 孔板測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為 y= 0.8775x+0.0062;x 為標準品濃度(mg/mL),
y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷Cpr2、按樣本干重計算直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷WV1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g最低檢測限為 1mg/g 干重或 10μg/mgprot。
上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供的直鏈淀粉含量試劑盒科研試劑和完善的技術服務,滿足生物化學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。