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麥芽糖含量測試盒測定原理介紹:
測定意義:
麥芽糖是由兩個葡萄糖單位經由α-1,4 糖苷鍵連接而成的二糖,又稱麥芽二糖。麥芽糖是淀粉、糖原、糊精等大分子多糖類物質在β-淀粉酶催化下的主要水解產物,再經麥芽糖酶催化,則被水解成兩個葡萄糖分子。麥芽糖不僅參與了生物體內糖代謝,其在食品和醫藥工業等行業也著廣泛應用,是產品質量控制的重要指標之一。
測定原理:
麥芽糖酶將樣品中麥芽糖水解為葡萄糖; 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。需自備的儀器和用品:
酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰、和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 70mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加 6 mL 試劑一溶解后待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存;試劑三:液體 10ml×1 瓶,4℃保存; 試劑四:液體 10ml×1 瓶,4℃保存; 麥芽糖提取:按照樣本質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入1mL 試劑一),研磨成勻漿,95℃水浴 10 分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。測定步驟:
1、 酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 505nm。
2、 混合試劑的配制:使用前將試劑三和試劑四 1:1 等體積混合,用多少配多少。
3、 測定管:取 200μL 上清,加入 100μL 試劑二,混勻,55℃反應 60 min,待測。對照管:200μL 上清,加入 100μL 試劑一,混勻,55℃反應 60 min,待測。
4、加樣表(在 96 孔板中加入下列試劑): 試劑(μL) 測定管 對照管
測定管待測液 40
對照管待測液 40
混合試劑 160 160
混勻,40℃保溫 30 min 后,于 505nm 波長處讀取吸光度。測定管和對照管吸光值分別記為A 測定和 A 對照。ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。
麥芽糖含量計算:
標準條件下測定回歸方程為 y = 2.8944x + 0.0052;R2 = 0.9997;為標準品濃度(mg/mL),y
為吸光值差值。
麥芽糖(mg/g 鮮重)=(ΔA-0.0052) ÷2.8944×V 總÷W =0.3455×(ΔA-0.0052)÷W
V 總:加入提取液體積,1 mL;W:樣本質量,g
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