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產(chǎn)品中心

  • 人宮頸上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TWC-75015H
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨,1周左右
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產(chǎn)品名稱 : 人宮頸上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞

基本形態(tài) :  上皮細(xì)胞樣
培養(yǎng)條件 :  上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基
生長特性 :  貼壁生長
培養(yǎng)環(huán)境 :  37℃,5%CO2,95%AIR
備 注  :  該細(xì)胞為國內(nèi)通過慢病毒 SV40T 轉(zhuǎn)染建立永生化,提供免疫熒光鑒定
細(xì)胞復(fù)蘇
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 T25 培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次:
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3、棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個 T25), 補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
細(xì)胞凍存
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次;
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3、棄上清,沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的之禮無血清凍存液,混勻后加入凍存管中。
(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液)
4、將凍存細(xì)胞用程序降溫盒放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。


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