細胞信息
細胞名稱 |
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細胞品牌 |
通蔚生物 |
種屬來源 |
人 |
組織來源 |
手術(shù)切除的正常包皮組織 |
生長特性 |
貼壁生長 |
細胞形態(tài) |
多角形細胞 |
細胞鑒定 |
vWF免疫熒光染色為陽性。 |
細胞簡介 |
皮膚指身體表面包在肌肉外面的組織,是人體最大的器官,主要承擔著保護身體、排汗、感覺冷熱和壓力等功能。皮膚由表皮、真皮和皮下組織構(gòu)成。 微血管內(nèi)皮細胞受損已被視為創(chuàng)傷、感染、休克、腫瘤、血管疾病等多種疾病和綜合癥發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)。一旦微血管內(nèi)皮細胞受損,必然影響甚至破壞微血管內(nèi)皮細胞正常的生物學功能,引起多種疾病的發(fā)生。微血管內(nèi)皮細胞間連接與血管通透性有著非常密切的關(guān)系。微血管內(nèi)皮細胞合成與分泌前列環(huán)素、一氧化氮、內(nèi)皮源性超極化因子和內(nèi)皮素等物質(zhì),來維持血管的正常狀態(tài)。 |
質(zhì)量檢測 |
/ |
細胞規(guī)格 |
5x10?cells/T25或1mL凍存管 |
培養(yǎng)基 |
人原代真皮微血管內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基 |
培養(yǎng)條件 |
氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
凍存條件 |
無血清凍存液,液氮儲存 |
細胞代數(shù) |
第1代 |
細胞貨期 |
2-3周左右 |
發(fā)貨方式 |
復蘇發(fā)貨(免運輸費用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用) |
供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實驗使用,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
特別說明 |
具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 |
細胞培養(yǎng)操作
收貨處理 |
取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài) |
細胞復蘇 |
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,加入約4 mL完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。 |
傳代密度 |
細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng) |
傳代比例 |
首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 |
傳代方法
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a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
細胞凍存 |
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~ 1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
注意事項
重要提醒 |
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。 2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。 3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。 4. 運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 |
到貨須知 |
1. 收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否完全揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2 .靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 3. 由于運輸?shù)脑颍糠旨毎捎跍囟茸兓皠×遗鲎菜劳銎扑樾纬伤槠钦,F(xiàn)象。個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。 |
售后服務(wù)
細胞予重發(fā) |
1. 細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā)。 |
2. 收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。 |
3. 收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā)。 |
4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后,干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后,絕大多數(shù)細胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā)。 |
5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實后,重發(fā)。 |
6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā)。 |
細胞不予重發(fā) |
1. 客戶操作造成細胞污染,不重發(fā)。 |
2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
4. 細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。 |
5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。 |
6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā)。 |
特別說明 |
上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009,我們隨時給予實驗中的免費解答。 |