細(xì)胞名稱

人源心肌細(xì)胞（IPSC誘導(dǎo)心肌細(xì)胞）

細(xì)胞品牌

通蔚生物

細(xì)胞簡介

人源心肌細(xì)胞（正常型）是一種即用型的高純度心肌細(xì)胞產(chǎn)品。將誘導(dǎo)多能干細(xì)胞高效分化、純化而成。心肌細(xì)胞主要由具備自主電生理活動的心室肌樣細(xì)胞組成，同時也包含少量心房肌和竇房結(jié)樣細(xì)胞。這些細(xì)胞表達(dá)常規(guī)的心肌特異性基因，包括多種收縮蛋白和離子通道。同時，心肌細(xì)胞具備經(jīng)典的心肌細(xì)胞電生理活性，能夠?qū)﹄妼W(xué)、生物化學(xué)和機械刺激做出心肌細(xì)胞的常規(guī)反應(yīng)。以電生理和鈣轉(zhuǎn)導(dǎo)信號記錄為例，這些細(xì)胞可以作為新藥篩選，毒理學(xué)測定和其他生理學(xué)研究的理想工具。

產(chǎn)品優(yōu)勢

高純度人源細(xì)胞：與傳統(tǒng)鼠源心肌細(xì)胞不同，心肌細(xì)胞是一種高純度的體外人源細(xì)胞。嚴(yán)格的質(zhì)檢把控，確保心肌細(xì)胞純度達(dá)95%以上。特有人類心肌細(xì)胞屬性。

動作電位：具備正常人類心臟的標(biāo)準(zhǔn)電生理學(xué)特征，受到電刺激后產(chǎn)生搏動。  

收縮功能：具備正常人類心臟的電收縮偶聯(lián)，具備心臟特有的收縮功能，自主搏動節(jié)律接近成人竇性心律。

離子通道：具備正常人類心肌細(xì)胞的絕大部分離子通道，為科學(xué)研究提供更準(zhǔn)確的模型疾病特異型細(xì)胞通過重編程疾病特異型體細(xì)胞，例如表皮成纖維細(xì)胞及CD34+血細(xì)胞。

細(xì)胞規(guī)格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基

人源心肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

傳代特征

心肌IPSC誘導(dǎo)心肌細(xì)胞是終末分化的功能細(xì)胞，與人體內(nèi)的心肌細(xì)胞性質(zhì)相同，不能增殖擴增

凍存細(xì)胞

凍存細(xì)胞存于-80℃冰箱，2周有效期；長期需液氮儲存

消化液

/

細(xì)胞貨期

7-8周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

需要材料

1.DPBS, No Calcium, No Magnesium  2.RPMI1640 3.FBS

心肌細(xì)胞進(jìn)行再接種

a.如果需要將心肌細(xì)胞按合適密度接種到新的培養(yǎng)皿/瓶中，可對心肌細(xì)胞進(jìn)行再接種，再接種操作會導(dǎo)致20%左右的細(xì)胞死亡，即損失20%的細(xì)胞。

b.室溫平衡心肌細(xì)胞復(fù)蘇液、DPBS溶液，37℃預(yù)熱心肌細(xì)胞消化液。

c.取出心肌細(xì)胞鋪板液包被過的培養(yǎng)皿/瓶，吸去心肌細(xì)胞鋪板液并加入適量心肌細(xì)胞復(fù)蘇液，置于5%CO 2 的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

d.吸除心肌細(xì)胞培養(yǎng)基，加入DPBS溶液清洗一次。

e.移除DPBS，加入預(yù)熱的心肌細(xì)胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。

f.37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞相互分離，表明達(dá)到理想的消化時間。

g.向皿/瓶中加入消化液3-5倍體積的RPMI1640+10%FBS終止消化，用槍扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的心肌細(xì)胞脫落，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，再加入適量中和液沖洗皿/瓶底，收集剩余細(xì)胞加入15ml離心管中，300g離心5分鐘。

I .小心移除上清，用心肌細(xì)胞復(fù)蘇液重懸細(xì)胞，輕柔吹打混勻，并接種到包被過的培養(yǎng)皿/瓶中，十字晃動使細(xì)胞均勻分布。

II.5%CO 2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時后，更換為心肌細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

III.心肌細(xì)胞需要在二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2-8天恢復(fù)搏動；此期間心肌細(xì)胞需要每隔48h換一次心肌細(xì)胞培養(yǎng)基。

重要提醒：吹打力度要輕柔，避免損傷細(xì)胞。亦可用心肌細(xì)胞培養(yǎng)基+10%FBS終止消化。

培養(yǎng)材料準(zhǔn)備

心肌細(xì)胞鋪板液包被培養(yǎng)皿/瓶：在4℃冰面上，往培養(yǎng)皿/瓶中添加心肌細(xì)胞鋪板液至完全覆蓋皿/瓶底(建議1ml/六孔板單孔)，37℃包被1小時。如果暫時不用，可用塑封膜封口后2-8℃儲存，并于1周內(nèi)使用，保存期間心肌細(xì)胞鋪板液需始終保持完全覆蓋皿底。

重要提醒：操作時需要將鋪板液始終置于冰上；正確操作下鋪板液應(yīng)呈清亮，若操作時間過長或溫度過高，鋪板液會變得粘稠甚至呈膠狀，不宜使用。

心肌細(xì)胞復(fù)蘇(適用于凍存的細(xì)胞）

a.將心肌細(xì)胞復(fù)蘇液從4°C冰箱中取出，室溫平衡30分鐘。

b.打開水浴鍋，設(shè)定溫度為37°C。

c.開啟生物安全柜進(jìn)行紫外滅菌30分種。

d.在冰上將1ml心肌細(xì)胞鋪板液加入6孔板的一個孔中(0.1ml/cm 2 )，隨即前后左右晃動6孔板，使鋪板液均勻覆蓋孔的表面。

e.將剩余鋪板液迅速放回冰箱，將6孔板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。

f.取出孵育好的6孔板，放于生物安全柜中，吸除心肌細(xì)胞鋪板液后，立刻在孔內(nèi)加入1ml 心肌細(xì)胞復(fù)蘇液。

g.從高效液氮儲存罐中取出需要復(fù)蘇的細(xì)胞，將其放于干冰中暫存。

h.從干冰中取出細(xì)胞，迅速將凍存管的下1/2沒入水浴鍋中，輕柔晃動1-2分鐘至管中僅剩一小塊冰時，將其取出。

i.75%酒精擦拭凍存管表面后，將其放入生物安全柜中，擰開管蓋，用1ml槍尖輕柔的將管中液體盡可能多的轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，用1ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液輕柔沖洗凍存管，以5秒鐘一滴的速度將沖洗液緩慢滴加入15ml離心管，邊滴加邊輕柔晃動離心管。

j.再用槍尖以同樣速度，滴加1ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液至15ml離心管，邊滴加邊輕柔晃動離心管。

k.用移液管由慢（2秒鐘一滴）到快的滴加9ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液，同時輕柔晃動離心管。300g離心5分鐘。

l.在生物安全柜內(nèi)吸除上清，用2ml移液管取1ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液輕柔吹打細(xì)胞沉淀3-5次后，將其加入6孔板中，前后左右十字晃動混勻（可按比例稀釋計數(shù)）。

m.顯微鏡下觀察，細(xì)胞均勻分布。

n.在6孔板上標(biāo)記好細(xì)胞名稱、日期以及操作人員后，將其放入細(xì)胞培養(yǎng)箱，再次前后左右晃動混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱種培養(yǎng)24-48小時至絕大多數(shù)細(xì)胞貼壁后即可換液為心肌細(xì)胞培養(yǎng)基。

重要提醒：心肌細(xì)胞復(fù)蘇計數(shù)后，可按需求接種至需要的培養(yǎng)容器；

心肌細(xì)胞培養(yǎng)時，按照推薦的密度接種，能夠抑制成纖維細(xì)胞生長速度；

重要提醒：心肌細(xì)胞復(fù)跳后，建議繼續(xù)培養(yǎng)1-2天穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

心肌細(xì)胞維持

a.將心肌細(xì)胞培養(yǎng)基室溫平衡30分鐘。

b.將心肌細(xì)胞用心肌細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，每48小時換液一次。更換時，貼壁加入培養(yǎng)基避免刮碰細(xì)胞；亦可加入標(biāo)準(zhǔn)量150%的心肌細(xì)胞培養(yǎng)基，每72小時換液一次。

重要提醒：細(xì)胞在6-8周內(nèi)性狀穩(wěn)定。如果需要長期培養(yǎng)，為了維持細(xì)胞穩(wěn)定性和純度，需要定 期采用心肌細(xì)胞純化液進(jìn)行處理,一般每6周處理一次

重要提醒

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

到貨須知

1. 收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

3. 由于運輸?shù)脑颍糠旨?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

細(xì)胞予重發(fā)

1. 細(xì)胞運輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細(xì)胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說明

上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。