細(xì)胞名稱

人內(nèi)皮祖細(xì)胞

細(xì)胞品牌

通蔚生物

種屬來源

人

組織來源

外周血

生長特性

貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)

長梭狀，不規(guī)則細(xì)胞

細(xì)胞簡介

內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,在生理或病理因素刺激下,可從骨髓動員到外周血參與損傷血管的修復(fù)研究顯示,內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路。

內(nèi)皮祖細(xì)胞具有游走特性，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)。其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。

質(zhì)量檢測

CD31和CD34免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等

細(xì)胞規(guī)格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基

人內(nèi)皮祖細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率

每2-3天換液一次

消化液

0.25%胰蛋白酶

細(xì)胞貨期

現(xiàn)貨，2周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

收貨處理

取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1 mL人原代內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查人原代內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞密度。

傳代密度

細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)

可傳1-2代；不建議多次傳代，建議收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集人原代內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL人原代內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

重要提醒

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

到貨須知

1. 收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

3. 由于運輸?shù)脑颍糠旨?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

細(xì)胞予重發(fā)

1. 細(xì)胞運輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細(xì)胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說明

上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。