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產(chǎn)品中心

  • 牛脾臟白細(xì)胞

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    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨 , 一周左右
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  • 相關(guān)產(chǎn)品

細(xì)胞信息

細(xì)胞名稱

牛脾臟白細(xì)胞

細(xì)胞品牌

通蔚生物

種屬來源

組織來源

脾臟

生長(zhǎng)特性

細(xì)胞為混合體系,大部分懸浮生長(zhǎng),小量貼壁生長(zhǎng)

分離方法

通過密度梯度離心獲得

細(xì)胞簡(jiǎn)介

白細(xì)胞(英文名:leukocyte,white blood cell,簡(jiǎn)稱:WBC),舊稱白血球。血液中的一類細(xì)胞。白細(xì)胞經(jīng)復(fù)合染料染色后,可根據(jù)其形態(tài)差異和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無特有的顆粒可分粒細(xì)胞和無粒細(xì)胞。無粒細(xì)胞又分為單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞兩種。血液中有三種類型的淋巴細(xì)胞:B細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞。粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有嗜色顆粒,分為中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞。在顯微鏡下可以看到,血細(xì)胞中體積比較大、數(shù)量比較少。具有細(xì)胞核。白細(xì)胞能吞噬異物產(chǎn)生抗體,在機(jī)體損傷治愈、抗御病原的入侵和對(duì)疾病的免疫方面有重要作用。

細(xì)胞鑒定

血涂片,Giemsa染色驗(yàn)證

支原體檢測(cè)

牛脾臟白細(xì)胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

細(xì)胞規(guī)格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基

牛脾臟白細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件

氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

凍存條件

無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞代數(shù)

1代

細(xì)胞貨期

現(xiàn)貨 1周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨(免運(yùn)輸費(fèi)用)/  凍存發(fā)貨(需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用)

供應(yīng)范圍

僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用,絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主


細(xì)胞培養(yǎng)操作

收貨處理

取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

傳代密度

細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿

傳代方法

 

a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。


注意事項(xiàng)

重要提醒

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

到貨須知

1. 收到細(xì)胞后,首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否完全揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照),記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

3. 由于運(yùn)輸?shù)脑颍糠旨?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 

售后服務(wù)

細(xì)胞予重發(fā)

1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)

2. 收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)

3. 收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)

4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)

5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)

6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)

細(xì)胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)

2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)

3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)

6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,不重發(fā)

特別說明

上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話021-54845833或15800441009,我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。

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