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產(chǎn)品中心

  • 貓外周血中性粒細胞

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    • 目錄號 : TW-CC11099
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨 , 一周左右
    • 商品庫存:100
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細胞信息

細胞名稱

貓外周血中性粒細胞

細胞品牌

通蔚生物

種屬來源

組織來源

外周血

生長特性

懸浮生長

分離方法

通過密度梯度離心獲得

細胞簡介

中性粒細胞(neutrophil)是在瑞氏(Wright)染色血涂片中,胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色,有許多彌散分布的細小的(0.2~0.4微米)淺紅或淺紫色的特有顆粒。細胞核呈桿狀或2~5分葉狀,葉與葉間有細絲相連。中性粒細胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細胞來源于骨髓,具有分葉形或桿狀的核,胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細顆粒。這些顆粒多是溶酶體,內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類,與細胞的吞噬和消化功能有關(guān)。中性粒細胞來源于骨髓的造血干細胞,在骨髓中分化發(fā)育后,進入血液或組織。在骨髓、血液和結(jié)締組織的分布數(shù)量比是28:1:25,成年人血液中中性粒細胞的數(shù)量約占白細胞總數(shù)的55%一70%。

細胞鑒定

CD11b/Integrin alpha M+、CD15+、CD45+或CD18+免疫熒光染色為陽性,細胞純度高于90%

支原體檢測

貓外周血中性粒細胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

細胞規(guī)格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基

猴骨髓中性粒細胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件

氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

凍存條件

無血清凍存液,液氮儲存

細胞代數(shù)

1代

細胞貨期

現(xiàn)貨 1周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨(免運輸費用)/  凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用)

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主


細胞培養(yǎng)操作

收貨處理

取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

細胞復(fù)蘇

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,加入約4 mL完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。

傳代密度

細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

 

a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存

待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。


注意事項

重要提醒

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

到貨須知

1. 收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否完全揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

3. 由于運輸?shù)脑颍糠旨毎捎跍囟茸兓皠×遗鲎菜劳銎扑樾纬伤槠钦,F(xiàn)象。個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。

 

售后服務(wù)

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā)

2. 收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)

3. 收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā)

4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后,干冰凍存發(fā)貨細胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā)

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實后,重發(fā)

6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā)

細胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染,不重發(fā)

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā)

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā)

特別說明

上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009,我們隨時給予實驗中的免費解答。

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