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產(chǎn)品中心

  • 人膀胱癌細胞 ; HT-1376

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-CC8184
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 7天
    • 商品庫存:100
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基本信息
細胞名稱 人膀胱癌細胞 ; HT-1376
細胞品牌 通蔚生物
細胞規(guī)格 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞英文 HT1376 ; HT 1376 ; HT 1376.T
基本形態(tài) 上皮細胞樣
傳代方法 1:2傳代
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% ;溫度:37℃
生長特性 貼壁生長
消化時間 3-5分鐘左右
凍存條件 無血清細胞凍存液
完全培養(yǎng)基 EMEM+10%FBS HT-1376完全培養(yǎng)基
培養(yǎng)環(huán)境 37℃,5%CO2,95%AIR
供應(yīng)范圍 僅供科研使用
特征特性 已通過STR

到貨處理
1、收到細胞后,檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題,請即時聯(lián)系。
2、將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或-80 度冰箱保存,建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系,會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。
特別說明:未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細胞復(fù)蘇
1、從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。
3、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 T25 培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞傳代
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。
3、棄上清,沉淀細胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進行分瓶傳代(兩個 T25),補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞凍存
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。
3、棄上清,沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液,混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液)
4、將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。
T25細胞到貨處理
觀察
收到細胞后,請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(40x,100x,200x 各一張)前三天照片為重要售后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
4、收到細胞后,及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài),并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。
貼壁
未超過 80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留 5ml 完全培養(yǎng)基,放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首次傳代,建議 1:2 傳代兩個 T25,傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,進行對比培養(yǎng)。
細胞注意事項
個別細胞貼壁不牢,在運輸過程中發(fā)生細胞脫落,這是正?,F(xiàn)象。
請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm 離心 5min,收集上清(后期對比培養(yǎng)使用),沉淀加入胰酶 1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化 1-2 分鐘后,加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代(兩個 T25),補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意:如收到密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松
細胞予重發(fā)
1.細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)。
2.收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。
3.收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā)。
4.常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后,干冰凍存發(fā)貨細胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā)。
5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實后,重發(fā)。
6.細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā)。
細胞不予重發(fā)
1.客戶操作造成細胞污染,不重發(fā)。
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。
3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。
4.細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。
5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。
6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā)。
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