基本信息
細(xì)胞名稱 |
|
細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
細(xì)胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
細(xì)胞英文 |
MFE 280 ; MFE280 |
細(xì)胞來源 |
ECACC |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
該人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞由通蔚生物制備并提交,可用于基礎(chǔ)研究和科研使用 |
種屬來源 |
人 |
組織來源 |
子宮 |
疾病特征 |
子宮內(nèi)膜腺癌 |
支原體檢測(cè) |
陰性 |
細(xì)胞形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
生長特性 |
貼壁生長 |
生長條件 |
氣相:空氣,95% ;二氧化碳,5% ; 溫度:37℃ |
傳代方法 |
1:2至1:6,每周2次 |
培 養(yǎng) 基 |
RPMI 1640,90% ;FBS,10% |
凍存條件 |
90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲(chǔ)存 |
發(fā)貨方式 |
快遞運(yùn)輸(特殊情況的另處理) |
供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用,不得用于其它用途 |
接受后處理
處理1 |
收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液 ,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們 |
處理2 |
請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h |
處理3 |
棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基 |
處理4 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基 |
處理5 |
接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系 |
細(xì)胞操作
復(fù)蘇細(xì)胞 |
將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
細(xì)胞傳代 |
如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng): |
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 |
|
2. 加 1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 |
|
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 |
|
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
|
細(xì)胞凍存 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類: |
1. 棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 |
|
2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml 細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 |
|
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
|
注意事項(xiàng) |
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 |
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
|
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常, 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。 |
|
4. 靜置細(xì)胞貼壁后,請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng),待細(xì)胞匯合度80%左右時(shí)正常傳代。 |
|
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。 |
售后服務(wù)
細(xì)胞予重發(fā) |
1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)。 |
2. 收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。 |
3. 收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
細(xì)胞不予重發(fā) |
1. 客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)。 |
2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。 |
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。 |
6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,不重發(fā)。 |
特別說明 |
上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話021-54845833或15800441009,我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。 |