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  • Hela-Cas9-531穩定表達的人宮頸癌細胞

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-CC6680
    • 應用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現貨
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基本信息

細胞名稱

Hela-Cas9-531穩定表達的人宮頸癌細胞

細胞品牌

通蔚生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶

細胞英文

Hela-Cas9-531細胞

細胞簡介

該細胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細胞穩定表達Cas9-Flag-Neo,經400ug/mlG418篩選得到的單克隆,經Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白,可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。

種屬來源

組織來源

子宮

疾病特征

宮頸癌

細胞形態

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長

  

RPMI 1640,90% ;FBS,10%

生長條件

氣相:空氣,95% ;二氧化碳,5% ; 溫度:37℃

傳代方法

1:2至1:6,每周2次

凍存條件

90%完全培養基+10%DMSO,液氮儲存

支原體檢測

陰性

發貨方式

快遞運輸(特殊情況的另處理)

供應范圍

僅限于科研實驗使用,不得用于其它用途


接受后處理

處理1

收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發給我們

處理2

請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養基,添加6ml本公司附帶的完全培養基

處理4

如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養用6ml本公司的完全培養基

處理5

接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系


細胞操作

復蘇細胞

將含有1mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代

如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.  1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.  6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞凍存

待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1. 棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml 細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。

3. 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養;如果染色結果顯示細胞無活力,請拍下照片及時和我們聯系,信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內的培養基倒出,留6~8mL 維持細胞正常培養,待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養,培養瓶內多余的培養基可收集備用,細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合,使細胞逐漸適應培養條件。


售后服務

細胞予重發

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發

2. 收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發

3. 收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發

4. 常溫發貨細胞靜置2小時后,干冰凍存發貨細胞復蘇2天后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發

5. 常溫發貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后,出現污染經核實后,重發

6. 細胞活性問題在收到產品3天內提出真實實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發

細胞不予重發

1. 客戶操作造成細胞污染,不重發

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發

3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發

4. 細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片,不重發

5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發

6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發

特別說明

上海通蔚生物客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以撥打免費服務電話021-54845833或15800441009,我們隨時給予實驗中的免費解答。

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