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021-54845833/15800441009
基本信息
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細(xì)胞名稱 |
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細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
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細(xì)胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞英文 |
L-O2細(xì)胞 |
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細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
該人正常肝細(xì)胞由通蔚生物制備并提交，可用于基礎(chǔ)研究和科研使用 |
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種屬來(lái)源 |
人 |
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組織來(lái)源 |
肝 |
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支原體檢測(cè) |
熒光法 |
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細(xì)胞形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
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生長(zhǎng)特性 |
貼壁生長(zhǎng) |
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生長(zhǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5% ; 溫度：37℃ |
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傳代方法 |
1：3至1 : 6，每周2次 |
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培 養(yǎng) 基 |
RPMI-1640，90%；FBS，10% |
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凍存條件 |
95% 培養(yǎng)基+5% DMSO，液氮儲(chǔ)存 |
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發(fā)貨方式 |
快遞運(yùn)輸(特殊情況的另處理) |
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供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于其它用途 |
接受后處理
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處理1 |
收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們 |
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處理2 |
請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h |
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處理3 |
棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基 |
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處理4 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基 |
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處理5 |
接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系 |
細(xì)胞操作
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復(fù)蘇細(xì)胞 |
將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
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細(xì)胞傳代 |
如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng): |
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1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 |
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2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 |
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3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 |
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4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
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細(xì)胞凍存 |
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類: |
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1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 |
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2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 |
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3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項(xiàng) |
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 |
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2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
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3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。 |
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4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度80%左右時(shí)正常傳代。 |
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5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。 |
