細胞培養操作
細胞名稱 |
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貨 號 |
TW-CC3778 |
細胞品牌 |
通蔚生物 |
種屬來源 |
小鼠 |
組織來源 |
肺 |
生長特性 |
半貼壁生長 |
細胞形態 |
上皮細胞樣 |
細胞簡介 |
Luciferase LLC細胞穩定表達螢光蛋白。該細胞株性狀穩定,培養時不需要添加抗生素維持。可用作螢光蛋白活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。LLC細胞是小鼠Lewis肺癌細胞。 |
puro藥篩濃度 |
LLC-GFP細胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml,培養過程中可不用再添加puro,如若擔心抗性隨著傳代時間降低,可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
保藏機構 |
ATCC; CRL-1642 BCRC; 60050 BCRJ; 0145 ECACC; 90020104 |
生物安全等級 |
1 |
細胞規格 |
1x10?cells/T25培養瓶或者1mL凍存管 |
培養基 |
90% DMEM+10% FBS+PS |
培養條件 |
氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
凍存條件 |
無血清凍存液,液氮儲存 |
細胞貨期 |
現貨,1周左右 |
發貨方式 |
復蘇發貨(T25瓶免運輸費用)/ 凍存發貨(需加干冰運輸費用) |
供應范圍 |
僅限于科研實驗使用,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 |
細胞培養操作
T25瓶 |
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收貨處理 |
觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h,以便穩定細胞狀態 |
傳代密度 |
細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養 |
傳代比例 |
首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 |
傳代方法 |
a、收集細胞培養上清:抽出瓶中的培養基和懸浮的細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清,細胞重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基)。 b、剩下貼壁的細胞,用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細胞1次。 c、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。 d、按3mL/瓶補加培養基,輕輕打勻吹下細胞后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。 e、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養中。 |
注意事項
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1.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F象。 |
凍存管 |
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收貨處理 |
收到細胞后,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 |
傳代密度 |
第二天換液并檢查細胞密度 |
傳代比例 |
一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶 |
傳代方法 |
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 |
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1.收貨時若發現干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存。 2.為保證細胞的高存活率,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞。 |
細胞凍存操作
凍存液配方 |
無血清凍存液,液氮儲存 |
細胞密度 |
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例 |
凍存方法 |
a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
注意事項 |
凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案 |
售后服務
細胞予 |
1.細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發。 |
2.收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發。 |
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3.收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發。 |
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4.常溫發貨的細胞靜置2小時后,干冰凍存發貨細胞復蘇2天后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發。 |
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5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后,出現污染,經核實后,重發。 |
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6.細胞活性問題,請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發。 |
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細胞不予 |
1.客戶操作造成細胞污染,不重發。 |
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發。 |
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3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發。 |
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4.細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片,不重發。 |
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5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發。 |
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6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發。 |
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特別說明 |
上海通蔚生物客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以撥打免費服務電話 : 021-54845833 ,我們隨時給予實驗中的免費解答。 |