6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)試劑盒(WST-8法)分光法/48樣
測定規格:48樣
有 效 期:6個月
測定方法:分光光度法
保存條件:低溫避光保存
產品簡介:
6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH;EC 1.1.1.49)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是磷酸戊糖途徑的關鍵酶,同時維持 NADPH 在細胞內的水平,NADPH 反過來維持細胞中谷胱甘肽水平進而保護細胞免受氧化損傷。因此 G6PDH 活性的高低可以從一定程度上反映生物體的生物合成和抗氧化能力。G6PDH 催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內酯,同時將 NADP+還原為 NADPH,傳統方法是檢測 NADPH 在 340nm 處的吸光值。由于 NADPH 的摩爾消光系數(ε)較低,所以這種方法靈敏度低,且嚴重受到干擾。本試劑盒提供一種簡單,靈敏,快速的測定方法:該酶促過程產生的 NADPH 與特異顯色劑反應產生在 450nm 處有最大吸收峰的有色物質,通過檢測 450nm 處的增加速率,進而計算出 G6PDH 酶活性大小。
試劑盒組成和配制:
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、研缽、冰。
6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGDH)活性測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗樣本和試劑浪費!
標準曲線制作過程:
1. 制備標準品母液(1nmol/μL):向標準品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸餾水(母液需在兩天內用且-20℃保存)。
2. 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。
3. 依據 40μL 標準品+720μL 試劑一+40μL 試劑三,混勻后室溫 5min 后于 450nm 處讀值,根據結果即可制作標準曲線。