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021-54845833/15800441009
簡(jiǎn) 介：
使用強(qiáng)有力的偶聯(lián)技術(shù)將磁珠粒子表面全部用于結(jié)合天然的鏈霉親和素，提高生物素標(biāo)記分子的捕捉能力和降低背景信號(hào)。結(jié)合的鏈霉親和素磁珠表面具有更高的功能穩(wěn)定和更優(yōu)良的均勻性。磁珠表面擁有一層具有很強(qiáng)鍵合能力的鏈霉親和素，同時(shí)具有優(yōu)異的可重復(fù)性。具有高效的液相反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特性。磁珠粒徑1000nm。由聚苯乙烯包覆。本公司提供不同包裝規(guī)格的產(chǎn)品1mL、5mlL、20mL。固含量為10mg/ml。
儲(chǔ) 存：
懸浮于10mM pH7.4的PBS緩沖液中 其中（0.02% Proclin300，0.02% Tween 20），2-10℃保存，保質(zhì)期為18個(gè)月。儲(chǔ)存時(shí)磁珠容器要豎直存放，保證沉降下來的磁珠被溶液保護(hù)，防止粘附在管壁上面的磁珠失水，磁珠生物活性下降。避免冰凍，冰凍后可能造成磁珠活性下降。1mg鏈霉親和素磁珠可結(jié)合 1000 pmoles游離生物素400 pmoles生物素化寡核苷酸15ug生物素化抗體。雙鏈DNA結(jié)合情況與片段長度有關(guān)。
原 理：
鏈霉親和素偶聯(lián)的磁珠作為固相基質(zhì)可簡(jiǎn)便快捷、有效地與許多生物素化復(fù)合物結(jié)合，如小分子肽類、蛋白、抗體、糖類、凝集素、寡合核苷酸DNA/RNA等，因而其可用于分子與免疫診斷、細(xì)胞分選、cDNA表達(dá)文庫的建立和藥物篩選等。
注 意：
鏈霉親和素磁珠結(jié)合能力與特定靶分子的大小有關(guān)。確保樣品中無過量的游離生物素存在，因?yàn)橛坞x生物素比大分子量的靶分子更容易與鏈霉親和素結(jié)合。生物素化引物擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物溶液中，盡量去除游離生物素化引物，然后與磁珠結(jié)合，因?yàn)樯锼貥?biāo)記的引物比帶生物素的DNA片段更容易與磁珠結(jié)合。去除生物素化引物可以通過超濾法、微透析法，一般的DNA純化回收也是可以的去除生物素標(biāo)記的引物。
建議每次應(yīng)用中，磁珠的用量應(yīng)通過滴定法進(jìn)行優(yōu)化，配體分子的大小和生物素化程度均可能影響二者結(jié)合能力。磁珠與生物素化配體的比例會(huì)直接影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，磁珠數(shù)量恒定下，生物素化配體在較低溶度情況下，隨著生物素化配體溶度的增加，磁珠與配體結(jié)合后，其具有的配體結(jié)合靶物質(zhì)能力提高，但是超過飽和吸附后，生物素化配體增加，不能提高磁珠配體結(jié)合體的與靶物質(zhì)結(jié)合能力。
生物素化配體的制備，推薦使用如Pierce 或 Sigma生產(chǎn)的生物素化試劑。不同的功能集團(tuán)：胺類、巰基羧基碳水化合物、酪氨酸和組氨酸側(cè)鏈、胍、胞嘧啶堿基都可以用生物素標(biāo)記。生物素化過程中可能造成靶分子的活性喪失，需要根據(jù)具體應(yīng)用避免。在DNA合成過程中一般是在寡核苷酸引物5’端標(biāo)記生物素，用Pierce或Sigma的biotin-X-NHS Ester可以將蛋白質(zhì)生物素化。當(dāng)磁珠與配體結(jié)合后，用配體去捕獲目標(biāo)物，需要保證靶物質(zhì)游離在溶液中，而且與配體結(jié)合的位點(diǎn)裸露在外面。
操作步驟（供參考）：
磁珠準(zhǔn)備
1、使用前渦旋均勻（也可采用超聲分散，將試管小心放入普通超聲波清洗器中，超聲3min左右），用移液器取需要量的磁珠到一離心管中。
2、離心管置于磁力架中約1分鐘左右可完成分離。用移液器移除液體。
3、加入特定實(shí)驗(yàn)的洗滌液體，試管蓋好，漩渦震蕩混勻。然后磁分離移除液體。
4、重復(fù)1~2次洗滌步驟，并將磁珠懸浮于適量溶液。
做抗體或蛋白相關(guān)實(shí)驗(yàn)前可采用PBS或生理鹽水緩沖溶液洗滌SA磁珠2~3遍；做核酸相關(guān)實(shí)驗(yàn)前應(yīng)使用1× B&W Buffer洗滌至少3遍后使用。2× B&W Buffer：10mM Tris-Hcl(pH7.5) 1mM EDTA 2M NaCl。本產(chǎn)品未添加核糖核酸酶，做RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)前應(yīng)做去除RNase處理，RNA實(shí)驗(yàn)：使用溶液A（A液：DEPC-treated 0.1M NaOH DEPC-treated 0.05M NaCl）洗滌SA磁珠兩次，每次2min，再用溶液B （DEPC-treater 0.1M NaCl）洗滌一次，最后將SA磁珠懸浮于B液中。
與生物素化配體結(jié)合：
鏈霉親和素磁珠與Biotin-Antibody或Biotin- Peptides的結(jié)合：
1、計(jì)算磁珠和生物素化抗體所需用量。每mg鏈霉親和素磁珠最大量結(jié)合15ug 抗體或300pmol生物素化多肽，通常不需要加入飽和抗體/多肽。
2、懸浮磁珠后和生物素化抗體在室溫下孵育30分鐘，旋轉(zhuǎn)混勻。
3、孵育后，離心管置于磁力架2分鐘，移除上清。
4、用PBS/BSA洗滌磁珠4-5次。
5、懸浮磁珠稀釋至所需濃度，用于下游實(shí)驗(yàn)。
鏈霉親和素磁珠與核酸的結(jié)合：
1、取適量洗滌好的磁珠。
2、用2xB&W緩沖液懸浮磁珠使終濃度為1ug/ul或?qū)嶒?yàn)的適宜濃度。
3、加等體積的生物素化DNA/RNA 溶液。
4、室溫下，旋轉(zhuǎn)或輕敲離心管混合。30bp左右片段孵育10分鐘左右，1kb左右片段孵育15分鐘。
5、孵育后，將離心管放在磁力架上1到2分鐘，并移除液體。
6、用1xB&W緩沖液洗滌磁珠2-3次。
8、最后用適宜的溶液懸浮磁珠，表面結(jié)合了核酸片段的磁珠，用于進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
鏈霉親和素磁珠與抗體蛋白以及核酸的解離：
抗體/蛋白分離：將結(jié)合后的磁珠重懸于0.1% SDS中，置于95℃左右水中5分鐘。
注意：這樣可能導(dǎo)致蛋白活性下降。核酸分離：用PH8.0的TE溶解，95℃溫浴5分鐘，可以解離約98%的核酸。
