編號 |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
2×qPCR MagicMix |
500 μL(棕色管) |
試劑二 |
熒光 PCR 專用模板稀釋液 |
1 mL(黃蓋) |
試劑三 |
鴨跖草染料法PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑四 |
鴨跖草染料法PCR 陽性對照(1×10E8 /μL) |
50 μL(紅蓋) |
試劑五 |
DNA 病毒裂解液(試用裝) |
15 次(9 mL) |
|
使用手冊 |
1 份 |
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加):
成分
樣品管 N+2 個(gè)
PCR陰性對照管
PCR陽性對照管2-7 管
2×qPCR MagicMix (棕色管)
10μL
10 μL
各 10 μL
鴨跖草 PCR 引物混合液(白蓋)
2 μL
2 μL
各2 μL
自備 10×ROX (見注)
2 μL
2 μL
各 2 μL
N+2 待測樣品 DNA 模板
6 μL
不加
不加
第7步所得PCR陽性對照稀釋液2-7 號
不加
不加
各6μL2號樣到2號管3號樣到3號管…
注: 僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照,其他熒光 PCR 儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。
過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
預(yù)變性 |
92℃ |
5分鐘 |
PCR反應(yīng)30個(gè)循環(huán) |
94℃ |
60秒 |
50℃ |
60秒 |
|
72℃ |
60秒 |