編號 |
成分 |
規格 |
試劑一 |
2×Probe qPCR MagicMix |
500μL(本色蓋) |
試劑二 |
熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL(黃蓋) |
試劑三 |
假單胞菌屬通用qPCR引物混合液 |
100μL(白蓋) |
試劑四 |
假單胞菌屬通用qPCR探針 |
50μL(棕色管) |
試劑五 |
假單胞菌屬通用探針法qPCR陽性對照(1×10E8/μL) |
50μL(紅蓋) |
使用手冊 |
1 份 |
成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照管 |
標準曲線樣品管2-7管 |
2×Probe qPCR MagicMix |
10μL |
10μL |
各10μL |
假單胞菌屬通用qPCR探針 |
1μL |
1μL |
各1μL |
假單胞菌屬通用探針法qPCR引物混合液 |
2μL |
2μL |
各2μL |
N+2個待測DNA模板 |
7μL |
-- |
-- |
超純水 |
-- |
7μL |
-- |
第7步所得標準曲線樣品稀釋液2-7號 |
-- |
-- |
各7μL2號樣到2號管,3號樣到3號管 |
過程 |
溫度 |
時間 |
預變性 |
95℃ |
3 min |
PCR反應40個循環 |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
1 min(采集FAM通道的熒光信號) |
四、數據處理:
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。若重復結果 Ct值小于 40,擴增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽性,否則為陰性。
五、特別提示: