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品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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產(chǎn)品中心

  • 酵母菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

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    購買數(shù)量

    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW40152
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫/避光保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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產(chǎn)品及特點(diǎn): 
酵母菌是應(yīng)用很早的微生物。據(jù)史料記載我國四千年前的殷商時代,勞動人民就用酵母菌釀酒。酵母菌的用途更加廣泛,與人類關(guān)系十分密切,在釀造、食品、醫(yī)藥工業(yè)等方面占有重要地位。可廣泛用于食品發(fā)酵、釀造啤酒和制造酒精等。酵母菌菌體含豐富的蛋白質(zhì)及維生素,可作藥用酵母片及飼料添加劑。此外酵母菌也是生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白、提取制備核苷酸、輔酶 A、細(xì)胞色素 C 及多種氨基酸等的理想原料,因此可進(jìn)行工業(yè)化大批量生產(chǎn)酵母菌,用以補(bǔ)充食物或飼料以及生產(chǎn)維生素和有機(jī)酸等。當(dāng)然,酵母菌也常給人類帶來危害。如腐生型酵母菌能使食物、紡織品和其它原料腐敗變質(zhì);某些酵母菌可引起人和動植物的病害,如白假絲酵母菌可引起皮膚、黏膜、呼吸道、消化道等多種疾病。本公司開發(fā)對酵母菌屬通用的染料法熒光定量 PCR 試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)酵母菌屬通用保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
規(guī)格及成分:

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×qPCR MagicMix

500 μL(棕色管)

試劑二

熒光 PCR 專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

酵母菌屬通用染料法PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

酵母菌屬通用染料法PCR 陽性對照(1×10E8 /μL)

50 μL(紅蓋)

試劑五

DNA 病毒裂解液(試用裝)

15 次(9 mL)

 

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存:
低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。
自備試劑:
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例):
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備:
8. 如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝)或第 5 號(濃度為 1×10E5拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 10 萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。如果每次制備需要 200μL 樣品,則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。
9. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次一管式病毒DNAout。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行):
10. 如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于 PCR 陽性對照。如果做 2-3 次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管 N+2個

PCR陰性對照管

PCR陽性對照管(2-7管)

2×qPCR MagicMix(棕色管)

10μL

10μL

10μL

酵母菌屬通用PCR引物混合液(白蓋)

2μL

2μL

2μL

自備10×ROX(見注)

2μL

2μL

2μL

N+2待測樣品DNA模板

6μL

不加

不加

7步所得PCR陽性對照稀釋液(2-7號)

不加

不加

6μL2號樣到2號管,3號樣到3號管

注: 僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照,其他熒光 PCR 儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。
12.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

過程

溫度

時間

預(yù)變性

92℃

5分鐘

PCR反應(yīng)30個循環(huán)

94℃

60秒

50℃

60秒

72℃

60秒

13.數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA時,最大吸收光譜在471nm,結(jié)合DNA時的最大吸收光譜在500nm,最大發(fā)射光譜在530nm。信號采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。
四、數(shù)據(jù)處理:
14.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
15. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
五、特別提示:
本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
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