腸出血性大腸桿菌O157 H7血清型PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點：

腸出血性大腸桿菌 O157:H7 血清型(Enterohemorrhagic E. coli，EHEC)是能引起人的出血性腹瀉和腸炎的一群大腸埃希氏菌。該菌會引發(fā)出血性結(jié)腸炎，通常是突然發(fā)生劇烈腹痛和水樣腹瀉，數(shù)天后出現(xiàn)出血性腹瀉，可發(fā)熱或不發(fā)熱。部分患者可發(fā)展為溶血性尿毒綜合癥、血栓性血小板減少性紫癜等，嚴重者可導(dǎo)致死亡，因此快速檢測腸出血性大腸桿菌 O157:H7 血清型具有重要意義。

本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的腸出血性大腸桿菌O157:H7 血清型檢測試劑盒，

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增腸出血性大腸桿菌O157:H7血清型，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1mL（亮黃色）
試劑三	腸出血性大腸桿菌O157:H7血清型PCR引物混合液	100μL（白蓋）
試劑四	腸出血性大腸桿菌O157:H7血清型PCR陽性對照1×10E8 /μL	50μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 腸出血性大腸桿菌O157:H7血清型PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
腸出血性大腸桿菌O157:H7血清型PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對照腸出血性大腸桿菌O157:H7血清型PCR陽性對照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4.按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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腸出血性大腸桿菌O157 H7血清型PCR試劑盒說明書
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