編號 |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
2×qRT-PCR 緩沖液 |
500 μL(棕色管) |
試劑二 |
10×qRT-PCR 酶混合液 |
100 μL(紅蓋) |
試劑三 |
ROX 染料 I,50× |
20 μL(棕色管) |
試劑四 |
ROX 染料 II,50× |
20 μL(棕色管) |
試劑五 |
熒光 PCR 專用模板稀釋液 |
1mL(黃蓋) |
試劑六 |
豬嵴病毒(庫布病毒)染料法 qRT-PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑七 |
豬嵴病毒(庫布病毒)染料法 qRT-PCR 陽性對照 (1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑八 |
沙核酸釋放劑(試用裝) |
20 次(1mL,綠蓋) |
試劑九 |
使用手冊 |
1 份 |
成分 |
N+2個制備 所得樣品 |
qRT-PCR 陰性對照 |
qRT-PCR陽性對照(2-7管) |
2×qRT-PCR緩沖液 |
10μL |
10μL |
各10μL |
豬嵴病毒(庫布病毒)染料法qRT-PCR引物混合物 |
2μL |
2μL |
各2μL |
50×ROX (見注) |
0.4μL |
0.4μL |
各0.4μL |
樣品制備所得RNA 模板(來于第8步) |
5.6μL |
-- |
-- |
稀釋所得6個陽性對照 (來于第6步) |
-- |
-- |
各5.6μL2號樣到2號 管,3號樣到3號管 |
超純水 |
-- |
5.6μL |
-- |
10×qRT-PCR酶混合液 |
2μL |
2μL |
2μL |
過程 |
溫度 |
時間 |
RT(逆轉(zhuǎn)錄) |
50℃ |
15-30 min |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
Qrt-PCR反應(yīng)40個循環(huán) |
95℃ |
15 sec |
58℃ |
1 min,(采集FAM通道的熒光信號) |
|
按儀器預(yù)設(shè)程序進行溶解曲線分析 |