描 述:
RAPA3G DNA 聚合酶為經電子重構架的第三代 TaqDNA 聚合酶,第三代 DNA 聚合酶具有高度的雜質耐受性、長片段擴增能力、高擴增成功率、高產量,這些特點使得RAPA3G 系列產品可用于粗制樣品的直接擴增,無需核酸純化步驟。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切酶活性、3’-5’的外切酶活性,產物部分帶有”A“尾巴,部分為平末端,因此產物可用于 TA 克隆或平端克隆。
特點和用途:
(1)高雜質耐受性:該 PCR Mix 可直接使用多糖多酚含量極高的葉片等材料進行 PCR 擴增,無需基因組提取。
(2)高效的快速 DNA 釋放劑:盡管該 PCR Mix 可以直接使用葉片進行擴增,但我們仍然推薦采用 DNA 釋放劑進行樣本的快速前處理(約需要 5min,可高通量操作)。DNA 釋放劑的前處理,使得制備的 DNA 模板可以進行多次、多基因擴增,并長期保存植物 DNA,經 DNA 釋放劑處理的樣本,在室溫條件下放置 1 個月,無任何后續影響,-20 可長期保存。
(3) 快速 PCR:該酶具有 6kb/min 以上的擴增速度,可顯著的縮短 PCR 的擴增時間,在常規測試條件下,10s 的延伸時間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴增。
(4)粗制樣品的擴增能力:擴增能力>1.7kb。
(5) 高保真性能:該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶,因此其具有一定的保真性能(經藍白斑測試,其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的 56 倍)。
(6)熱啟動,防止非特異性擴增:RAPA3G 系列產品均采用 HaiGene 專有的熱啟動技術,確保 50 度以下完全無活性,僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復其活性,因此可最大限度的提高擴增的特異性,減少非特異性產物的產生。
儲 存:
長期儲存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 4°C(3 個月)保存。
使用方法:
1. DNA 釋放:
(1)采用加熱法:取 2-3mm 直徑葉片(白 Tip 頭上沿大小)、1-10mg 果實等材料,放入到 0.2ml EP 管中,加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑 A,于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min,加熱完畢后加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑 B,混合均勻,即可使用。
(2)采用鋼珠研磨法:取 2-3mm 直徑葉片、1-10mg 果實等材料,放入到 2ml EP 管中,加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒鋼珠,研磨 1-2min 成漿體裝。研磨完畢后加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 B,混合均勻,即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反應體系并混合均勻:
3. 請注意:
(1)該制品為熱啟動制品預變性步驟 5min 不可縮短,否則 DNA 聚合酶無法恢復活性。(2)當擴增片段<1kb時,延伸時間使用 15s;擴增片段 1-2kb 時,延伸時間使用45s,擴增片段 2-3kb 時,延伸時間使用 1min,當擴增片段>3kb 時,請按照 2kb/min 的延伸時間進行設置。(3)盡管該酶具有 6kb/min 的延伸速度,但按照 2kb/min 設置延伸時間的條件下,能獲得最高的產量。
注意事項:
(1)當模板 GC 含量>70%時,請添加5× Q-Solution。
(2)當采用全血、血漿等蛋白含量極高的樣本時,擴增完畢后可能會有變性的蛋白沉淀,請離心后再進行點樣和電泳。
四、特別提示:
本公司的所有產品,僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!