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產(chǎn)品中心

  • 副豬嗜血桿菌PCR試劑盒

    規(guī)格:
    數(shù)量:

    購買數(shù)量

    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW36932
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫/避光保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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副豬嗜血桿菌PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn):
副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, HPS)屬巴斯德氏菌科嗜血桿菌屬,是一種依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)且沒有運(yùn)動(dòng)性的小型、多形性、革蘭氏陰性桿菌。HPS 可引起豬多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎,嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致體溫升高、呼吸困難甚至死亡,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前對 HPS 的診斷主要是細(xì)菌分離培養(yǎng)和 PCR。HPS 培養(yǎng)需要 NAD、馬血清和 5%CO2 環(huán)境,需 24-36 小時(shí),還容易出現(xiàn)雜菌污染,因此 PCR 是目前診斷 HPS 最常用的方法。
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增副豬嗜血桿菌,與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規(guī)格及成分:

編號

成分

規(guī)格

試劑一

PCR MagicMix 3.0

1mL(紅蓋)

試劑二

超純水

1mL(亮黃色)

試劑三

副豬嗜血桿菌PCR引物混合液

100μL(白蓋)

試劑四

副豬嗜血桿菌PCR陽性對照1×10E8 /μL

50μL(黃蓋)

試劑五

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存:
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品 DNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容??梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品,則需要做N+2個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 副豬嗜血桿菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系):
3. 對N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對照和一個(gè)PCR陰性對照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:

成份

N+2個(gè)樣品管

PCR陰性對照

PCR陽性對照

PCR Magic Mix 3.0

20μL

20μL

20μL

副豬嗜血桿菌PCR引物混合液

2μL

2μL

2μL

N+2個(gè)樣品DNA模板

18μL

--

--

PCR陰性對照(水)

--

18μL

--

PCR陽性對照副豬嗜血桿菌PCR陽性對照1000倍稀釋液

--

--

18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng): 

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95℃

5 min

PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)

95℃

30 sec

55℃

30 sec

72℃

40 sec

最后延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測:
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴(kuò)增,否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示:
本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
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