產(chǎn)品及特點(diǎn):
人皰疹病毒 6 型(Human Herpesvirus-6,HHV-6)是從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒,可通過唾液飛沫及密切接觸(如接吻,共用餐、飲器具等)、輸血或器官移植傳播。除免疫低下(如先天性免疫缺陷、艾滋病、長期服用免疫抑制劑等)外,絕大多數(shù)人感染后終身都不會產(chǎn)生明顯癥狀;免疫低下者,如 HIV 感染者,當(dāng)人體特異性免疫被削弱至一定程度時(shí),潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感染癥狀,此時(shí)會出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀,活化的病毒可大規(guī)模感染 T 淋巴細(xì)胞,使免疫功能進(jìn)一步削弱,該病毒對人體健康有較大影響,因此檢測人皰疹病毒 6 型 DNA具有重要意義。
本產(chǎn)品就是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的、檢測此病毒的試劑盒。它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增人皰疹病毒6型,與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規(guī)格及成分:
編號 |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL(紅蓋) |
試劑二 |
超純水 |
1 mL(亮黃色) |
試劑三 |
人皰疹病毒6型 PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑四 |
人皰疹病毒6型 PCR 陽性對照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品,則需要做N+2個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 人皰疹病毒6型 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系):
3. 對N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對照和一個(gè)PCR陰性對照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:
成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
人皰疹病毒6型PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
PCR 陰性對照(水) |
-- |
18μL |
-- |
PCR 陽性對照(人皰疹病毒6型PCR陽性對照1000倍稀釋液) |
-- |
-- |
18μL |
過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
40 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴(kuò)增,否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示:
本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!