產品及特點:
水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-Zoster Virus,VZV) 是一種兒童初次感染引起水痘,恢復后病毒潛伏在體內,少數病人在成人后病毒再發而引起帶狀皰疹的病毒。水痘是具有高度傳染性的兒童常見疾病,多發于 2~6 歲,傳染源主要是患者,患者急性期水痘內容物及呼吸道分泌物內均含有病毒。曾患過水痘的病人引起帶狀皰疹后,初期局部皮膚有異常感,搔癢、疼痛,進而出現紅疹、皰疹,串連成帶狀,以軀干和面額部為多見,呈單側分布,病程約 3 周左右,少數可達數月之久,還有可能出現腦脊髓炎和眼結膜炎等并發癥。該病毒對人體健康有長期潛在危害,且該病毒可以有效檢測野生株和疫苗株,因此水痘-帶狀皰疹病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用,本產品是根據 PCR 原理開發的水痘-帶狀皰疹病毒檢測試劑盒,
它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增水痘-帶狀皰疹病毒,與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規格及成分:
編號 |
成分 |
規格 |
試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL(紅蓋) |
試劑二 |
超純水 |
1 mL(亮黃色) |
試劑三 |
水痘-帶狀皰疹病毒 PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑四 |
水痘-帶狀皰疹病毒 PCR 陽性對照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品,則需要做N+2個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 水痘-帶狀皰疹病毒PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系):
3. 對N+2個樣品,在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照,故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分
成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
水痘-帶狀皰疹病毒PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
PCR 陰性對照(水) |
-- |
18μL |
-- |
PCR 陽性對照(水痘-帶狀皰疹病毒PCR陽性對照1000倍稀釋液) |
-- |
-- |
18μL |
過程 |
溫度 |
時間 |
預變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
40 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現,陰性對照必須無任何擴增,否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示:
本公司的所有產品,僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!