產品及特點:
1. 一站式,用戶不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據萵苣大葉脈病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術,RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研,不能用于臨床。
規格及成分:
編號 |
成分 |
規格 |
試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL(橘黃蓋) |
試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL(紅蓋) |
試劑三 |
超純水 |
1 mL(亮黃蓋) |
試劑四 |
萵苣大葉脈病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑五 |
萵苣大葉脈病毒 RT-PCR 陽性對照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置,因為其容易污染其他成分,造成假陽性。
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 萵苣大葉脈病毒 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系):
3. 如果有 N+2 個樣品,則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照,另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:
成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
萵苣大葉脈病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
萵苣大葉脈病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
過程 |
溫度 |
時間 |
逆轉錄 |
42℃ |
30 min |
預變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
58℃ |
30 sec |
|
72℃ |
20 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物,則說明實驗失敗,需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現,才有必要分析樣品的實驗結果,如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性,如果無則為陰性。
四、特別提示:
本公司的所有產品,僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!