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品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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產(chǎn)品中心

  • 高地J病毒RT-PCR試劑盒

    規(guī)格:
    數(shù)量:

    購買數(shù)量

    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW35493
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫/避光保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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高地J病毒RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 一站式,用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據(jù)高地J病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
規(guī)格及成分:

編號

成分

規(guī)格

試劑一

5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黃蓋)

試劑二

MMLV-Taq Mix

75 μL(紅蓋

試劑三

超純水

1 mL(亮黃蓋)

試劑四

高地J病毒 RT-PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑五

高地J病毒 RT-PCR 陽性對照(1×10E8 /μL)

50 μL(黃蓋)

試劑六

使用手冊

1 份

注:為避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供專一的DNA 片段作為陽性對照。
運(yùn)輸及保存:
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置,因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞郑斐杉訇栃浴?/span>
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性對照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 高地J病毒PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系):
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是RT-PCR 陽性對照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

成份

N+2 個(gè)

樣品管

RT-PCR

陰性對照

RT-PCR

陽性對照

5×雙酶一管式RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

高地J病毒 RT-PCR 引物混合液

2 μL

2μL

2μL

N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品

12.5μL

--

--

超純水

--

12.5μL

--

高地J病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4.上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR,RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程

溫度

時(shí)間

逆轉(zhuǎn)錄

42℃

30 min

預(yù)變性

95℃

5 min

PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

最后延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測:
5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無擴(kuò)增產(chǎn)物,則說明實(shí)驗(yàn)失敗,需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn),才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性,如果無則為陰性。
四、特別提示:
本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
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