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產(chǎn)品中心

  • 大鼠附睪上皮細(xì)胞

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    價(jià)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW33869
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 : 大鼠附睪上皮細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 : 通蔚生物
組織來源 : 附睪
產(chǎn)品規(guī)格 : 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡介
大鼠附睪上皮細(xì)胞分離自附睪組織;附睪(Epididymis)是一個(gè)由曲折、細(xì)小的管 子構(gòu)成的器官,一端接著輸精管(D uctusdeferens),一端接著睪丸(T estis)的曲細(xì)精管,具體結(jié)構(gòu)主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣,可分為頭、體、尾三部。精子離開睪丸后通過輸出小管進(jìn)入附睪。附睪具有暫存精液并分泌附睪液營養(yǎng)精子的功能,以促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟附睪的功能是暫存精子,促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟。精子在附睪內(nèi)獲得運(yùn)動能力,總共停留8~17天,最終達(dá)到功能上的成熟。在這個(gè)過程中,精子除了自身的因素,還受到附睪微環(huán)境的影響,這包括了一系列的物理、化學(xué)變化和精子形態(tài)的改變。可以說,附睪微環(huán)境正常穩(wěn)定是附睪發(fā)揮促成熟這一功能的必要條件。

若附睪的功能發(fā)生異常,精子則不能成熟,引起不育。附睪上皮含有主細(xì)胞、基細(xì)胞、亮細(xì)胞等幾種類型細(xì)胞。基細(xì)胞,其頂部離附睪管腔有一定距離,在附睪各部分,其形態(tài)沒有差別,一般認(rèn)為是貯備細(xì)胞;另一種主細(xì)胞,是維持附睪生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ),在各區(qū)段的主細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別很大,這也反映出各區(qū)段的生理功能的差異。除上皮細(xì)胞外,附睪的管
壁組織結(jié)構(gòu)也有規(guī)律性的變化,附睪管起始段平滑肌有自發(fā)地節(jié)律性收縮,而尾部平滑肌就沒有這種特點(diǎn),僅在射精一瞬間出現(xiàn)強(qiáng)烈的節(jié)律收縮。

作為負(fù)責(zé)提供適合精子成熟微環(huán)境的附睪,具有活躍的分泌與吸收功能。其中,附睪上皮的電解質(zhì)和水分的轉(zhuǎn)運(yùn),對保持附睪內(nèi)合適的離子濃度和酸堿度,為精子成熟提供適宜的環(huán)境起著相當(dāng)重要的作用。睪丸的支持細(xì)胞每天能產(chǎn)生大量睪網(wǎng)液,如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網(wǎng)液,而從附睪排  出的只不過幾百微升,也就是說睪丸分泌液有99% 被附睪上皮重新吸收回體內(nèi)。動物實(shí)驗(yàn)表明,結(jié)扎輸精管時(shí)睪丸不會腫脹,但若結(jié)扎睪丸輸出小管,睪丸第二天就會腫脹,這就充分證實(shí)了附睪存在著強(qiáng)有力的吸收功能,但是重新吸收的意義尚不清楚。體外培養(yǎng)附睪上皮細(xì)胞對精子的發(fā)育、成熟,不孕不育,附睪生理基礎(chǔ)功能研究具有重要意義。

方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠附睪上皮細(xì)胞采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為為5×105cells/瓶 。

質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠附睪上皮細(xì)胞經(jīng)PC K 免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息
包被條件 : 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培  養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、EG F、H ydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、T ransf
errin、Selenium Solution、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細(xì)胞形態(tài) : 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 : 可傳1-2代
傳代比例 : 1:2
消  化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
大鼠附睪上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

使用方法
大鼠附睪上皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操
作流程下,細(xì)胞可傳1-2代;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2)添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至
5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 復(fù)蘇操作說明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋,預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶,加入10ml完全培養(yǎng)基(培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積)。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管,用EP手套包裹凍存管(防止管內(nèi)進(jìn)水導(dǎo)致污染),迅速放于水
浴鍋內(nèi),于1min內(nèi)融化完全。
4.取出凍存管,酒精噴灑消毒后擦干,置于超凈臺內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液,加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi),8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),靜置培養(yǎng)24h,更換新鮮換培養(yǎng)基(注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法)。
4.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1m g/ml),明膠(0.1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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