產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品名稱(chēng) : 大鼠精原細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 : 通蔚生物
組織來(lái)源 : 睪丸組織
產(chǎn)品規(guī)格 : 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
大鼠精原細(xì)胞分離自睪丸組織;睪丸呈微扁的卵圓形,表面光滑,覆蓋著鞘膜臟層;深部是質(zhì)地堅(jiān)韌的白膜,在睪丸后緣增厚并進(jìn)入睪丸,形成睪丸縱膈,縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實(shí)質(zhì),將實(shí)質(zhì)分為睪丸小葉,數(shù)量約為100~200。每個(gè)小葉內(nèi)約有2~4條生精小管具有產(chǎn)生精子的作用;生精小管之間的結(jié)締組織中有睪丸間質(zhì)細(xì)胞,具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱(chēng)直精小管),精直小管進(jìn)入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng),之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12~15條輸出小管通過(guò)睪丸后上緣進(jìn)入附睪。生精小管的生精上皮是精子產(chǎn)生的地方,由生精細(xì)胞和支持細(xì)胞構(gòu)成,成人的生精小管有30~70cm 長(zhǎng)。
精子的產(chǎn)生過(guò)程包括生精細(xì)胞的分化、支持細(xì)胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細(xì)胞并不是一種細(xì)胞,它是多種細(xì)胞的統(tǒng)稱(chēng),包括精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者,且依次從生精上皮的基部到管腔面排列,最終形成精子進(jìn)入到管腔之中,并借助生精上皮外側(cè)的肌樣細(xì)胞的收縮作用向下一級(jí)管腔移動(dòng)。精原細(xì)胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次有絲分裂而形成的細(xì)胞。原始的胚細(xì)胞經(jīng)分化形成精原細(xì)胞,精原細(xì)胞經(jīng)復(fù)制形成初級(jí)精母細(xì)胞,初級(jí)精母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)第一次分裂后形成次級(jí)精母細(xì)胞,再經(jīng)過(guò)減數(shù)第二次分裂形成精細(xì)胞。
精細(xì)胞經(jīng)過(guò)變形最終形成精子。精原細(xì)胞屬于雄性生殖細(xì)胞的早期發(fā)育階段,能不斷地進(jìn)行有絲分裂,增加細(xì)胞數(shù)量,并分化為精母細(xì)胞。精原細(xì)胞貼近基膜,細(xì)胞呈圓形,核大而圓,梁色深。精原細(xì)胞在男性的一生中具有幾乎無(wú)限分裂的能力,而且分裂過(guò)程中能夠保持原有的基因性狀 不變。在增殖過(guò)程中,通過(guò)精原細(xì)胞的分裂和分化,由精原細(xì)胞產(chǎn)生精母細(xì)胞,進(jìn)入成熟 分裂,因而通過(guò)增殖可大大增加精母細(xì)胞的數(shù)量。
按理論推算,一個(gè)精原細(xì)胞通過(guò)數(shù)次細(xì) 胞分裂,可形成上百個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞。但在生精過(guò)程早期,生精細(xì)胞很易發(fā)生變性,故實(shí) 際上少于這個(gè)數(shù)字。在精原細(xì)胞的增殖過(guò)程中,有一部分Ad型精原細(xì)胞不再繼續(xù)分裂, 而是保留下來(lái),成為新的精原干細(xì)胞,因此通過(guò)增殖不僅能使精原干細(xì)胞不斷得到更新, 且能使精原干細(xì)胞保持一定數(shù)量,從而使精子的產(chǎn)生持續(xù)地進(jìn)行下去,不會(huì)枯竭。
方法簡(jiǎn)介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠精原細(xì)胞采用混合酶多步消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測(cè)
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠精原細(xì)胞經(jīng)A P (堿性磷酸酶)免疫組化染色鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、G D N F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 : 貼壁
細(xì)胞形態(tài) : 圓形、橢圓形
傳代特性 : 可傳2-3代
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
大鼠精原細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用通蔚生物配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
大鼠精原細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形、橢圓形,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳2-3代;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶(hù)收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中,用吸管吸取PBS,吹洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;經(jīng)1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,收集細(xì)胞懸液至離心管中;經(jīng)1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞沉淀①、細(xì)胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞,按實(shí)驗(yàn)需求接種于實(shí)驗(yàn)器皿內(nèi),然后補(bǔ)充適量新鮮的
完全培養(yǎng)基,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,用于實(shí)驗(yàn);可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴(lài)氨酸PLL(0.1m g/m l),明膠(0.1% ),依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。